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第五章 灭菌与除菌 第一节 常用的灭菌方法 第二节 培养基与发酵设备的灭菌（重点） 第三节 空气的除菌（重点） 第四节 无菌检查与染菌的处理 第一节 主要的灭菌和除菌方法 灭菌：用物理或化学方法杀灭或除去所有活的 微 生物及其孢子的过程。 消毒：只杀死病原微生物，不一定杀死芽孢。 除菌：用过滤方法除去空气或者液体中的所有微生物及其孢子 常见灭菌方法的比较 操作过程： 空罐准备：清洗、检修和检测。 升温：把培养基加热到灭菌所需的温度。 保温维持：在灭菌温度下保持灭菌所需时间。 冷却保压：把培养基的温度降低到接种的温度。 三路进汽：直接蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内直接加热，直到所规定的温度，并维持一定的时间。这就是所谓的“三路进气”。 3. 空气过滤除菌介质 （１）纤维状或颗粒状过滤介质 棉花：常用，有弹性，纤维长度适中。 玻璃纤维：直径小，不易折断，过滤效果好。 活性炭：要求质地坚硬，颗粒均匀。 缺点：体积大，装填费时费力，松紧度不易掌握，空气压降大。 发酵生产中制备无菌空气的大致过程 高空取气管 为远离地面几十米的管子。 每升高10米，空气中杂菌降低一个数量级。因此从高空取气要比从低空取气有利得多。 第四节 无菌检查与染菌处理 1.无菌检查方法及判断 显微镜检查法 平板划线培养检查法 肉汤培养检查法 2.染菌原因分析 染菌时间 染菌种类 染菌的规模 3.制服染菌的要点 根据已有的制服染菌经验，按照生产要求，对发酵过程中涉及的空气净化系统、设备系统、蒸汽质量、工艺操作等要严格把关。 4.污染杂菌及噬菌体的处理 三、培养基和设备、管路灭菌的条件 1.杀菌锅内培养基灭菌 固体培养基灭菌蒸汽压力0.098Mpa，维持20~30min； 液体培养基灭菌蒸汽压力0.098Mpa，维持15~20min； 玻璃器皿及用具灭菌蒸汽压力0.098Mpa，维持30~60min 2.种子罐、发酵罐、计量罐、补料罐等的空罐及管道灭菌 从有关管道通入蒸汽，使罐内蒸汽压力达0.147Mpa。维持45min，灭菌过程从有关阀门排出空气，并使争取通过达到死角灭菌；灭菌结束，关闭蒸汽后，待罐内压力低于空气过滤器压力时，通入无菌空气保压0.098Mpa。 3.空气总过滤器和分过滤器灭菌 排出过滤器中空气，从过滤器上部通入蒸汽，并从下、下排气口排气，维持压力0.147Mpa，灭菌2h，灭菌完毕通入压缩空气吹干。 4.种子培养基实罐灭菌 从夹层通入蒸汽间接加热至80℃，再从取样管、进风管、接种管进蒸汽，进行直接加热，同时，关闭夹层蒸汽进口阀门，升温121℃，维持30min，谷氨酸发酵的种子培养基实罐灭菌为110℃，维持10min。 5.发酵培养基实罐灭菌 从夹层或盘管通入，蒸汽间接加热至90℃，再从取样管、进风管、接种管进蒸汽，进行直接加热，同时，关闭夹层蒸汽进口阀门，升温121℃，维持30min，谷氨酸发酵的种子培养基实罐灭菌为105℃，维持5min。 6.发酵培养基连续灭菌 一般培养基为130℃，维持5min， 谷氨酸发酵培养基为115℃，6~8min。 7.消泡剂的灭菌 直接加热至121℃，维持30min。 8.补料实罐灭菌 根据料液不同而异，淀粉料液为121℃，维持5min。 9.尿素溶液灭菌 105℃，维持5min。 第三节 空气除菌（净化） 发酵对空气无菌程度的要求 一般要求1000次使用周期中只允许有一个菌通过，即经过滤后空气的无菌程度为N=10-3。 空气中微生物(包括细菌、酵母、霉菌和病毒) 含量一般为103 ~ 104个／米3。一般附着在空气中的灰尘上或雾滴上。 灰尘粒子的平均大小约0.6μm左右，空气除菌主要去除空气中的微粒(0.6~1μm）。 一、空气除菌的方法 （一） 辐射杀菌 （二） 热杀菌? （三） 静电除菌 （四） 过滤除菌 二、空气过滤除菌的原理与介质 1.过滤除菌的种类 绝对过滤：过滤介质的滤孔小于细胞和孢子。 如聚乙烯醇缩甲醛树脂（PVF）制成的0.3 ?m的微孔滤膜。 深层介质过滤：介质的孔隙一般大于微生物细胞。 如用棉花、玻璃纤维和颗粒活性炭填充的过滤器。 2.深层介质过滤的原理 微粒随气流通过滤层时，由于滤层纤维的层层阻碍，使气流出现无数次改变运动速度和方向的绕流运动，引起微粒与滤层纤维间产生惯性冲击、拦截、布朗扩散、重力沉降、静电引力等作用把微粒滞留在纤维表面上，实现过滤的目的。 （２）纸类过滤介质——超细玻璃纤维纸 3?6张叠在一起使用，过滤效率高，压降小。