鸢尾黄斑病毒免疫磁珠RT-PCR检测方法的建立及应用.pdfVIP

上海农业学报2016，32(5)：70_74 Ac￡o Agric“2亡M，也e5矗口，lg五oi 文章编号：1000-3924(2016)05J070JD5 鸢尾黄斑病毒免疫磁珠RT-PCR检测方法的建立及应用 代欢欢1’。，崔全友3，宋绍神1，陶宇清1，杨翠云1，于翠h 摘要：鸢尾黄斑病毒是近年新发现的番茄斑萎病毒属的一个种，目前国内还没有发生、危害的报道。试验 以带有鸢尾黄斑病毒的烟草叶片为材料，建立了免疫磁珠RT—PCR高灵敏度的检测方法。通过抗体包被、吸附特 异性及灵敏度比较等试验，确定了免疫磁珠在样品处理中的作用。免疫磁珠RT—PcR方法最低可检测稀释至 用于样品处理，可大大增加病毒吸附效率，提高检测灵敏度。应用该方法检测进境葱类种子及田间大葱、洋葱等 样品150份，结果均未检出。 关键词：鸢尾黄斑病毒；免疫磁珠分离；RT—PCR；灵敏度 文献标识码：A 中图分类号：S432．41 0f t0 amethoddetect DeVelopment锄dappHcation J疏yP肋w印优 l，打Ms andRT·PCR byimmunomagneticseparation DAI Cuil+ Huan．huanl一，CUI Quan．you3，SONGShao．yil，TAOYu—qin91，YANGCui—yunl，YU 35，铂i触； (1虢口，神口iEm可一风拓如Pec￡如n口蒯QM口ron￡i聊B“陀口M，航口n加以2001 Abr，nof I％n把r，．厅n口n 2正心屉i Co比e舻，点心角i230601，C讫ino；3丘nonAgr0．Z幻^nofog，，J6k招，醛ion250002，C讫ino) one inrecent andits Abstract：，r曲弘如埘印优秽i兀昭(IYSV)isspeciesof乃印伽i，．淞discoveredyears notbeen inChina．HeretobaccoleavesinoculatedwitllIYSVwereusedasatestmaterial dama鼬has reponed anda methodto detectIYSVwas andreverse high—sensitivity developedbyimmunomagneticseparation chainreaction and transcriptase—polymemse(IMS—RT—PCR)．Thecoatingantibody，adsorptionspecificity testsascertainedthee由fectof beadsontIle treatment．TheIMS．RT—PCR sensitivitv immunomagnetics锄ple methodcoulddetecttheviIusinthe dilutedto thatits was10times than sap 10一o，indicating