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课件:第章发酵菌中选育.ppt
D-葡萄糖 2.5-二酮基-D-葡萄糖酸 2-酮基-L-古龙酸 L-抗坏血酸 欧文氏菌 棒杆菌 2.5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶 基因工程欧文氏菌 2019 - * 3、基因工程在抗生素生产菌种改造方面的应用 ①解除限速步骤,提高抗生素产量 在抗生素合成中,某些步骤对整个生物合成至关重要,对这些关键步骤酶(限速酶)的改造,可以提高抗生素的产量,如十一烷基灵红菌素和秦乐菌素生物合成的最后阶段的酶是限速酶,该过程是由一个甲基转移酶控制的,将该酶基因克隆后,经过适当改造,再转入原菌株阻断突变株中,使得该酶活性大幅度提高,最终使抗生素的合成能力提高了近10倍。 2019 - * ②阻断支路代谢,增加有效组份含量 阿维菌素B组分向A组分的转化是由aveD 基因编码的C5-O-甲基化酶催化的。 AveD 2019 - * ③引入抗性基因或调节基因,提高抗生素产量 大多数抗生素产生菌都具有对自身产生的抗生素的耐受能力,而抗生素的产量一定程度上取决于对自身产生的抗生素的耐受能力的大小,利用多烤贝质粒,克隆这些抗性基因,再转入到产生菌中,从而提高抗生素产生能力。 如克隆氨基糖苷δ’-乙酰转移酶基因,再转入卡那霉素和新霉素产生菌中,结果使菌种自身对氨基糖苷类抗生素的抗性增加,使卡那霉素和新霉素的产量提高了2~6倍。 2019 - * ④引入血红蛋白基因,提高抗生素产量 在抗生素发酵过程中,供氧往往是一个限制因素,且大量消耗能源。 在解决供氧方面也有不少成功的报道,美国科学家将与氧传递有关的透明颤菌的血红蛋白基因,克隆到天蓝色链霉菌中,可使在通气不足时放线紫红素的产量提高4倍。将血红蛋白基因克隆倒头孢菌素C产生菌后,该菌在发酵过程中氧耗明显下降,且有效增加了头孢菌素C的产量。 2019 - * 三、菌种退化 (一)、退化的原因 (二)、防止退化的措施 2019 - * 菌种退化:菌种的一个或多个特性,随时间的推移逐步减退或消失的现象,一般常指菌株的生活力、产孢能力衰退和目的产物产量的下降。 2019 - * (一)、退化的原因 1、菌系不纯 2、异核现象 3、自然分化现象 4、回复突变 5、培养条件或保藏方法不利 6、其它 2019 - * (一)、防止退化的措施 1、多做平行菌种,少转接传代 2、认真进行单菌落分离 3、选择有利于高产菌,不利于低产菌的培养条件 4、良好的保藏方法 2019 - * 四、菌种保藏 (一)、菌种保藏的原理 (二)、常用菌种保藏的方法 (三)、国内外重要的菌种保藏机构 2019 - * (一)、菌种保藏的原理 1、控制培养基营养成份在最低水平 2、缺氧 3、干燥 4、低温 2019 - * (五)培养分离 尽管通过增殖培养效果显著,但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离,纯化。在这—步,增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用,而且控制得细一点,好一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 2019 - * 菌种的培养温度 放线菌:25~30℃ 嗜热菌:45~55℃ 嗜冷菌: 4~10℃ 时间:延长培养时间可以分离到 新的或不寻常的菌株 2019 - * (六)筛 选 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件,通过三角瓶的容量进行小型发酵试验,以求得适合于工业生产用菌种。 2019 - * 菌种筛选时应考虑的一些重要指标: 1、菌的营养特性 2、菌的生长温度 3、菌对生产设备和生产过程的适应性 4、菌种的稳定性 5、容易从发酵液中提取产物 6、产物的得率高 2019 - * (七)毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的,将其作为生产菌种应当十分当心,尤其与食品工业有关的菌种,更应慎重。 据有的国家规定,微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外,其他微生物作为食用,均需通过两年以上的毒性试验。 2019 - * 第二节、高产菌株的选育 (一)、自然选育 (二)、常规诱变育种 (三)、合理诱变育种 (四)、原生质体融合技术 (五)、基因工程技术 2019 - * 从自然界直接分离得到的菌种,不能立即适合实际生产的需要,只有通过选育,才能提高产物的产量,改进品质,甚至
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