课件：第十章微生物应用技术.pptVIP

发酵过程一般是在发酵罐内进行的，发酵罐是一种圆柱形的容器，容量从几升到几百万升，罐上除有通气、搅拌、接种、加料、冷却等装置外，还有对温度、pH、通气量与转速等发酵条件进行检测和控制的装置。 发酵过程中环境条件的变化，不仅会影响菌种的生长繁殖，而且会影响菌种代谢产物的形成。为了使发酵过程能顺利进行，要随时取样，检测培养液中的细菌数目、产物浓度，同时还要及时为发酵菌提供必需的营养，并严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。　 四、发酵过程 2019 - * 发酵结束后，要对发酵液或生物细胞进行分离和提取精制，将发酵产物制成合乎要求的产品。对发酵产品的要求不同，分离提纯的方法也相应有些区别。利用发酵工程生产的产品有菌种代谢产物和菌种本身（如酵母菌和细菌）两大类，如果产品是菌种，分离方法一般是通过过滤、沉淀从培养液中分离出；如果产品是代谢产物，则采用蒸馏、萃取、离子交换等方法提取。分离提纯后的产品，还要经过质量检查合格后，才能成为正式产品。 五、分离提纯 2019 - * 工艺流程 2019 - * 第三节 工业发酵的主要产品 一、抗生素发酵生产 抗生素是生物体在生命活动中产生的一种次级代谢产物。这类有机物质能在低浓度下抑制或杀灭活细胞，这种作用又有很强的选择性。抗生素主要用微生物发酵法生产，少数抗生素也可用化学方法合成，人们还对天然得到的抗牛素进行生化或化学改造，使其具有更优越的性能，这样得到的抗生素叫半合成抗生素，其数目已达到两万多种。抗生素不仅广泛用于临床医疗，而且已经用于农业、畜牧及环保等领域。 青霉素是最早发现并用于临床的—种抗生素，1928年为英国人A . Fleming发现，40年代投入工业生产。在二战期间立刻大显身手，它能有效控制伤口的细菌感染，挽救了数百万战争中受伤者的性命。我们就以青霉素为例简单介绍抗生素的发酵生产过程。 2019 - * (一)青霉素发酵生产菌株 最初由弗莱明分离的点青霉，只能产生2 U／ml的青霉素。目前全世界用于生产青霉素的高产菌株，大都由菌株Wis Q l76(一种产黄青霉)经不同改良途径得到。70年代前育种采用诱变和随机筛选方法，后来由于原生质体融合技术、基因克隆技术等现代育种技术的应用，青霉素工业发酵生产水平已达85 000U／ml以上。青霉素生产菌株一般在真空冷冻干燥状态下保存其分生孢子，也可以用甘油或乳糖溶剂作悬浮剂，在－70度冰箱或液氮中保存孢子悬浮液和营养菌丝体。 2019 - * (二)青霉素发酵生产培养基 1、碳源　目前普遍采用淀粉经酶水解的葡萄糖糖化液进行流加。 2、氮源　可选用玉米浆、花生饼粉、精制棉籽饼粉或麸质粉，并补加无机氮源。 3、前体　苯乙酸或苯乙酰胺，由于它们对青霉菌有一定毒性，故一次加入量不能大于0．1％，并采用多次加入方式。 4、无机盐 包括硫、磷、钙、镁、钾等盐类，铁离子对青霉菌有毒害作用，应严格控制发酵波中铁含量在30ug／ml以下。 2019 - * (三)青霉素发酵工艺 1.种子制备 种子制备阶段以生产丰富的孢子（斜面和大米孢子培养）或大量健壮的菌丝体（种子罐）为目的。 2.发酵培养 影响青霉素发酵产率的因素有环境因素，如pH值、温度、溶氧饱合度、碳氮组份含量等；有生理变量因素，包括菌丝浓度、菌丝生长速度、菌丝形态等，对它们都要进行严格控制。 3.发酵后处理 (1)过滤：采用鼓式真空过滤器，过滤前加去乳化剂并降温 (2)提炼用溶媒萃取法。将发酵滤液酸化至pH 2，加1/3体积的醋酸丁酯，混合后以碟片式离心机分离，得一次BA提取液。然后以1.3 % ～ 1.9 %NaHCO3在pH 6.8 ～ 7.1条件下将青霉素从BA中提取到缓冲液中。再调pH至2.0，将青霉素从缓冲液再次转入到BA中，方法同上，二次BA提取液。 2019 - * (3)脱色 在二次B A提取液中加活性炭150 一300g／10亿单位，脱色、过滤。 (4)结晶 用丁醇共沸结晶法。将二次BA萃取以0.5 mol/L NaOH 液萃取，调pH至6.4 ～ 6.8，得青霉素钠盐水浓缩液。加3～4倍体积的丁醇，在16～26℃，5～10 mmHg下真空蒸馏，将水与丁醇共沸物蒸出，并随时补加丁醇。当浓缩到原来水浓缩体积，蒸出馏分中含水达2％ ～ 4 ％时，即停止蒸馏。 青霉素钠盐结晶析出，过滤，将晶体洗涤后进行干燥得成品。可在60℃，20mmHg真空中烘16 h，然后磨粉、装桶。 2019 - * 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是人体及动物的重要营养物质。谷氨酸是一种重要的氨基酸。我们就以谷氨酸的发酵生产为例简单介绍一下氨基酸的发酵生产。 (一)谷氨酸发酵生产的菌种 谷氨酸酵生产菌种主要