海藻糖在免疫检测体系中的应用及其生物活性保护效应的研究-免疫学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 。1 ABSTRACT 5 前言 9 第一章海藻糖封闭液在不同免疫检测体系中的应用 ll 1．1材料与方法 ll 1．1．1 主要试剂 l l 1．1．2主要溶液配制 ll 1．1．3 主要仪器与器材 14 1．1．4 ElLSA体系的建立 14 l。1．5 Dot．ELISA体系的建立 。14 1．1．6免疫印迹体系的建立 ．1 5 1．1．7细胞免疫组织化学体系的建立 15 1．1．8细胞免疫荧光体系的建立 15 1．1．9流式细胞术体系的建立 l 6 1．1．10统计学处理 16 1．2结 果 ．．1 6 1．2．1海藻糖封闭液在EILSA体系中的应用 。16 1．2．2海藻糖封闭液在Dot．ELISA体系中的应用 ．．22 1．2．3海藻糖封闭液在免疫印迹体系中的应用 ．．22 1．2．4海藻糖封闭液在免疫组化体系中的应片j ．．23 1．2．5海藻糖封闭液在免疫荧光体系中的应用 ．．24 1．2．6海藻糖封闭液在流式细胞术中的应用 。25 1．3讨 论 。26 1．4小 结 ．．28 第二章海藻糖对于抗体及细胞活性的保护作用 ．．29 2．1材料与方法 29 颁十学位论文2．1．1主要试剂 颁十学位论文 2．1．1主要试剂 3 l 2．1．2主要试剂的配制 3 1 2．1．3主要仪器与器材 3 1 2．1．4蛋白活性检测体系的建立 32 2．1．5细胞活性检测体系的建立 33 2．1．6统计学分析 33 2．2结 果 33 2．2．1海藻糖对于蛋白活性的保护 。33 2．2．2海藻糖应用于流式细胞术的检测 34 2．3讨 论 。35 2．4小 结 。36 文总结 ．38 考文献 ．39 述 ．4 l 录 47 习期间发表的论文及参加课题 54 谢 ．．55 位论文原创性声明 ．56 位论文版权使用授权书 。56 2 PBST PBST Phosphate·Buffered Saline／Tween 磷酸盐一吐温溶液 BSA Bovine serum albumin 牛血清门蛋门 ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 FCM Flow cytometry 流式细胞术 FITC Fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 TLR Toll Like Receptor T0ll样受体 Phycoerytherin 藻红蛋白 PVDF Polyvinylidene Difluoride 聚偏氟乙烯 HI冲Horseradish Pemxidase 辣根过氧化物酶 TMB Tetramethyl Benzidine 四甲基联苯胺 D溺 Ovalbumin 卵广1蛋白 limmunoglobulin G 免疫球蛋白G Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺 SDS．PAGE Gel Electropheresis 凝胶电泳 TEMED Etramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 TTBS Tris—Buffered Saline／Tween Tris．吐温洗液 Dithiothreitoi -．-：硫苏糖醇 3 硕十学位论文 硕十学位论文 摘 摘 要 海藻糖(trehalose)是一种由两个葡萄糖分子以Q，Q，l，卜糖苷键构成的 非还原性二糖，广泛存在于包括海洋生物海藻在内的多种动植物与微生物体内， 自身的化学及生物性质非常稳定。由于其能在高低温、高渗透压及失水等条件 下在细胞表面形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质等大分子的生物活性，被 广泛应用于生物技术领域作为活性物质的保护剂。我们在实验中发现，适当浓 度的海藻糖溶液不仅可以有效减轻高低温环境、时问以及固定剂、防腐剂对于 细胞及其结合抗体活性的影响，而且可以在多种不同的免疫检测体系中显著提 高信噪比，提高免疫检测的效率。 一、海藻糖封闭液在不同免疫检测体系中的应用 我们首先选取了免疫检测体系中应用最为普遍的酶联免疫吸附检测 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)作为评价体系。实验巾，我 们分别选择了抗原包被直接法检测抗体、抗原包被直接法检测抗血清、抗原包 被间接法检测抗体、抗原包被间接法检测抗血清以及双抗体夹心法检测抗原等 不同的ELISA体系进行研究，同时选择了5％脱脂奶粉封闭液、lO％tJ、牛血清、3％ 牛血清白蛋白(BSA)封闭液以及酪蛋白封闭液等常用封闭缓冲液作为对照检验 不同浓度海藻糖封闭液对-丁．检测体系检测敏感度与特异性的影响。结果表明， 在各种不同的检测体系，特别是糖结合抗原抗体反应体系中，海藻糖封闭液均 能