草莓枯萎病菌的分离鉴定及生物学特性-江苏农业科学.PDF

— １２４— 江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１１期 于红梅，赵密珍，王　静，等．草莓枯萎病菌的分离、鉴定及生物学特性［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１１）：１２４－１２７． 草莓枯萎病菌的分离、鉴定及生物学特性 于红梅，赵密珍，王　静，孟宪风 （江苏省农业科学院园艺研究所，江苏南京２１００１４） 　　摘要：应用ＰＣＲ技术，结合形态学手段，对草莓枯萎病病原菌种类进行鉴定，从江苏省农业科学院草莓生产基地 采集草莓枯萎病株，对草莓枯萎病病原菌进行分离鉴定。在ＰＤＡ培养基上用单孢分离法培养出３个单菌系，用交叉 显微镜初步鉴定该病原物为草莓枯萎病病原菌尖孢镰刀菌。以这３个菌系ＤＮＡ为模板，利用真菌通用引物ＩＴＳ１、 ＩＴＳ４对单菌系进行ＰＣＲ扩增，获得５４４ｂｐ转录间隔区片段（ＩＴＳ），序列测定、Ｂｌａｓｔ搜索比对结果表明，３个单菌系序列 完全一致，与番茄枯萎病病原菌的１８ＳｒＲＮＡ转录间隔区同源性达 １００％，均属尖孢镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）。以 ＰＤＡ为培养基，采用十字交叉法测定草莓枯萎病菌的生物学特性，结果表明：草莓枯萎病菌在１５～３５℃、ｐＨ值为４～ ８范围内均生长较好，最适温度为３０℃，ｐＨ值为５～８时菌落变化不明显。 　　关键词：草莓枯萎病；生物学特性；分离；培养 　　中图分类号：Ｓ４３６．６８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１１－０１２４－０３ 　　草莓（ＦｒａｇａｒｉａａｎａｎａｓｓａＤｕｃｈ．）属蔷薇科草莓属多年生 冷冻离心机、Ｔａｎｏｎ３５００凝胶成像系统、华利达ＺＤ－９５５６水 草本植物，果肉鲜美多汁，堪称“水果皇后”。草莓上市时间 平摇床等。 适逢鲜果匮乏期，且采摘持续时间长。近年来，草莓种植面积 １．４　方法 逐年增大，品种不断更新，频繁地调种、引种以及连作，导致草 １．４．１　草莓枯萎病菌株的分离、纯化　采用常规分离法，将 莓枯萎病蔓延。草莓枯萎病是由尖孢镰刀菌草莓专化型 病株根用自来水冲洗干净并晾干，在无菌操作台用７５％乙醇 （Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍｆ．ｓｐ．Ｆｒａｇａｒｉａｅ）从根部侵染引起的系统 消毒３０ｓ，０．１％ＨｇＣｌ浸泡６０ｓ，无菌水换洗３次；取１ｃｍ长 ２ 性病害，从苗期到收获期都会发生。草莓感染草莓枯萎病后， 病株根在无菌水中纵切成４份，再次移入 ＰＤＡ平板培养，用 ［６］ 地上部分表现为心叶变黄绿、卷曲呈船形、两边不对称，叶片 连续稀释法经单孢分离纯化后获得供试菌株 。ＰＤＡ培养 无光泽，叶柄及根部维管束变褐色或黑褐色，地下根系黑褐 基成分：马铃薯 ２００ｇ，葡萄糖 ２０ｇ，琼脂 ２０ｇ，蒸馏水 ［１］ １０００ｍＬ。　 色，不长新根 。该病可导致草莓结果减少、果实无法正常 ［２－３］ １．４．２　草莓枯萎菌菌丝、孢子形态　挑取纯化后菌株的边缘 膨大、品质降低，甚至全株枯死 。目前已有关于利用形 态学鉴定草莓枯萎病的报道。ＰＣＲ技术由于具有灵敏度高、 菌丝置于含ＰＤＡ的凹凸载玻片中，２５℃下置于灭菌培养皿 准确、快速等优点，已被广泛应用于植物病理学诊断领 中培养３ｄ，观察草莓枯萎菌菌丝、孢子形态。 ［４－５］ １．４．３　温度、ｐＨ值对菌丝生长及产孢的影响　用 ＮａＨＰＯ 域 。本研究应用ＰＣＲ技术，结合形态学手段，对草莓枯 ２ ４ 萎病病原菌种类进行了鉴定，旨在为草莓枯萎病抗病育种工 和柠檬酸，ＮａＯＨ和ＮａＢＯ 配制ｐＨ值分别为４０、５．０、６．０、