基因工程—农杆菌转化法.PPTVIP

生命科技学院0327赵如华 转化示意图 农杆菌转化的作物 教育技术0327赵如华 模板来自于 * 基因工程—农杆菌转化法 基因工程 1.基因工程的概念 基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础， 以分子生物学和微生物学的现代方法为手段， 将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图， 在体外构建杂种DNA分子， 然后导入活细胞， 以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、 生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。 2.将目的基因导入受体细胞的方法 农杆菌转化法、花粉管通道法、显微注射法、基因枪法 农杆菌 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物和裸子植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。 农杆菌 农杆菌转化法 *农杆菌介导的T-DNA的转移和整合是细菌和植物细胞相互作用发生生物学效应的过程，兼具原核生物中的细菌结合转移及真核细胞加工修饰的特点。 *农杆菌能够将Ti质粒上的T-DNA以单链的形式整合到宿主基因组中，使得科学家开始用农杆菌介导法将外源的Bt基因、除草剂基因以及一些营养改良基因转入作物基因组，获得转基因作物。 农杆菌转化法原理或实质 农杆菌转化法又名农杆菌Boletus介导转化法。 根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti(Tumour inducing)质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA(Transferring DNA)，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中，并且可以通过减数分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。科研人员将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。 标题 步骤 目的基因的检测与鉴定:用DNA分子杂交技术/分子杂交/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定，进行检验方法)。 最后将成功表达的细胞导入植物体内，对植物体进行个体生物学水平鉴定。 将目的基因导入受体细胞:将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。 获取目的基因:用限制性核酸内切酶切割下目的基因。 基因表达载体的构建:将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。 01 04 05 02 03 转化步骤 大蒜 石榴 玉米 番茄 优点 农杆菌Ti质粒转化系统与其他基因转化体系相比，具有许多突出的优点:质粒①该转化体系是模仿或称之为利用天然的转化载体系统，成功率高，效果好; ②农杆菌Ti质粒转化系统的机理研究得最清楚，方法最成熟，应用也最广泛; ③农杆菌Ti质粒转化系统转化的外源基因以单拷贝为多数，遗传稳定性好，并且多数符合孟德尔遗传规律，因此转基因植株能较好地为育种提供了中间选育材料; ④农杆菌Ti质粒转化系统操作比较容易，需要的仪器设备简单，易于推广。 缺点 农杆菌介导的基因转化也存在着一些缺点，如在 农杆菌转化过程中会对植物材料造成一些损伤， T-DNA转化有时引起左边界的丢失，可能会以串联的方式整合在染色体上，转化宿主存在局限性等。 “ ” 农杆菌转化法在水稻、小麦等作物中都得到了十分重要的应用。 展望（以水稻为例） 可以预计，随着分子生物学的迅速发展，很多问题都会逐步解决。通过农杆菌介导，将会有越来越多的有益基因被导入水稻而创造出新的种子资源，然后与常规育种结合而进行水稻品种改良。农杆菌介导的水稻遗传转化系统的完善，也将为水稻功能基因的大规模鉴定做出贡献。 教育技术0327赵如华 模板来自于 *