海尔曼螺杆菌的流行病学研究和致病性的活体评价-内科学(消化病系)专业论文.docxVIP

硕士学位论文 硕士学位论文 海尔曼螺杆菌的流行病学研究 和致病性的活体评价 硕士研究生：李静 指导教师：陈烨副教授 张亚历教授 摘 要 背景、目的： 海尔曼螺杆菌(Helicobacter heilmannii，H heilmannii)，是除幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori，月=pylori)以Pb的唯一能够在人胃定植的螺杆菌属细菌，被视 为胃炎的可能病原体。月：heilmannii感染与胃多种病变相关：急慢性胃炎、消化 性溃疡、胃癌和胃B细胞粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，也有引起食管疾病的报道， 其临床意义值得重视。与国外相比，我国有较高的H heilmannii感染率(欧美 0．25％-0．95％，国内1．78％～7．32％)。随着H pylori的发现获得诺贝尔奖，月：pylori 与慢性胃病的关系已得到广泛认同，抗菌治疗已成为常规。在大规模除菌治疗 多年后的今天，It．heilmannii的流行情况发生了什么变化却不得而知。至今为止， H heilmannii仍不能在体外培养成功，快速诊断还是主要依靠切片染色的形态学 方法。目前国外研究大多集中于流行病学调查，个案报道以及分子鉴定，国内 自94年后的研究一直处于空白，且heilmannii的致病机制尚不明确，目前世界上 尚未建立稳定传代的H heilmannii菌株。因此，构建H heilmanniifl皂持久定植的 实验动物模型、建立体外培养的稳定方法就显得尤为重要，成为深入研究的必 要手段和必然途径。 此次研究的目的：了解目前国内月=heilmannii的流行情况；体外培养月： heilmannii；建立月：heilmannii长期感染小鼠的实验动物模型；初步研究其致病机 中文摘要制。 中文摘要 制。 材料和方法： 1．收集南方医院消化科2005．2006年行上消化道电子胃镜活检的2339例患者 以及1994年1-4月819例患者的临床资料、内镜资料、病理标本。 2．筛检段heilmannii感染患者：对2007年1-6月行上消化道电子内镜检查的 703例胃镜受检者行胃粘膜涂片染色，镜下根据H heilmannii典型形态筛选 阳性患者，获取H heilmannii感染患者的胃粘膜活检标本并在小鼠体内传代 保存。 3．在多种培养基和多种气体条件以及不同温度条件下对成功定植且heilmannii 的鼠胃粘膜组织进行细菌的分离培养。 4．建立H heilmannii长期感染小鼠模型：4-6周龄健康雄性BALB／c小鼠、雌 性C57BL／6小鼠、雄性裸鼠各36只(SPF)，分别随机分为实验组(n-30)和 正常对照组(n=6)。实验组灌注月=heilmannii匀浆液0．2ml／只，并于灌胃 后第4、8、12、24、36周分别处死6只。正常对照组分别灌注无菌布氏肉 汤0．2ml／只，于实验第4、12、36周(裸鼠为4、8、12周)分别随机处死2 只9观察细菌定植情况和组织病理变化。 5．半定量RT-PCR检测SPF级Balb／c小鼠、C57BL／6小鼠和裸鼠胃粘膜的IFN吖、 IL．1 D、IL．4、IL．10mRNA表达水平差异，初步探索其致病机制。 结果： 1．从2339例胃镜活检标本中检出7例H heilmannii感染标本，总检出率为 0．30％，与国外同期报道相符，但低于90年代检出率0．98％(P=0．033)。 2．703例急慢性胃病患者中筛选出1例女性患者，并取其胃粘膜在小鼠体内传 代保存，在不同条件下进行培养尝试，目前未获成功。 3． 成功建立了BALB／c小鼠、C57BL／6小鼠、裸鼠月：heilmannii长期定植的动 物模型。三种小鼠的定植量随时间的延长都有增加的趋势，BALB／c小鼠有 显著性差异(Mann．Whitney U秩和检验，PO．05)。随着周期延长，BALB／c H 硕士学位论文 硕士学位论文 小鼠的慢性炎症评分在8周时最高，随后下降，而后期再次增高(严0．042)。 而C57BL／6小鼠持续较高，各时间点没有显著差异(P--0．877)。裸鼠未见 明显慢性炎症，但第4．12周全程维持着明显的中性粒细胞浸润 (Mann．Whitney U秩和检验，PO．05)。BALB／c小鼠急性活动性炎症评 分在12周最高，36周最低(Mann．Whitney U秩和检验，PO．05)；C57BL／6 小鼠活动性炎症评分最低，但8周以后趋于平稳(Mann．Whitney U秩和检 验，PO．05)。第24周后，实验组免疫健全小鼠开始出现轻度萎缩、肠化 和淋巴滤泡的形成，到第36周83％的受染BALB／c小鼠出现淋巴滤泡，明 显破坏粘膜肌层，甚至粘膜全层。对照组三种小鼠均未见明显感染和组织学 改变。 4．感染初