组织学技术(特殊染色).ppt

* PPT课件 伊红-醛复红染色法 同时显示胶原纤维和弹性纤维 Gomori氏醛-复红染液是Gomori在试验期间偶然 发现的由碱性品红、三聚乙醛、浓盐酸配制而成。 一、试剂配制 Gomori醛-复红染液： 70%乙醇100ml，碱性品红0.5g， 三聚乙醛1ml，浓盐酸1ml。 ※注意：先将碱性品红溶于乙醇中， 然后加入三聚乙醛和浓盐酸，静置1-2d， 待溶液变为深紫色后，过滤置于冰箱待用。 * PPT课件 三、制作过程 1、取皮下组织铺于干净的载玻片上，自然晾干。 2、放在甲醛-乙醇固定液内固定5min； 3、水洗3min； 4、置于醛-复红染液中，室温下染色5min； 5、水洗5min； 6、置伊红染液中，染色30s； 7、常规脱水、透明、封片。 四、结果 胶原纤维为红色，长带状，波浪状走行； 弹性纤维为紫色，细丝状，直行，末端卷曲。 二、取材 皮下组织 * PPT课件 * PPT课件 甲苯胺蓝染色显示肥大细胞 肥大细胞内含粗大的嗜碱性、异染性的水溶性颗粒， 颗粒内含有组胺、肝素等活性物质， 这些物质含有高分子的多硫酸脂和硫酸黏多糖类，能够与 甲苯胺蓝、美篮、中性红、硫堇等染料结合。 * PPT课件 1、取材 皮下组织 2、固定 Carnoy液 或 10%中性福尔马林液 皮下组织铺于干净的载玻片上，自然晾干后固定， 或石蜡切片，冰冻切片更好 3、染液配制 甲苯胺蓝溶液：甲苯胺蓝0.2g 60%乙醇100ml 混匀即可反复使用。 * PPT课件 4、染色过程 （1）石蜡切片脱蜡下行至蒸馏水； （2）入甲苯胺蓝溶液染色，室温10-30min； （3）蒸馏水洗； （4）丙酮或100%乙醇脱水两次，各2min； （5）二甲苯透明，树胶封固。 5、结果 肥大细胞颗粒呈紫色，核浅蓝色。 * PPT课件 * PPT课件 * PPT课件 特殊染色用于显示标本中的一些结构， 使其在显微镜下与其它组织或细胞区别. 特殊染色 单一特殊染色 复合特殊染色 一种染料对一种组织结构或细胞进行染色 多种染料对多种组织结构或细胞进行染色 * PPT课件 糖原染色方法： 糖原为细胞内的多糖或粘多糖， 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少，可以反映机体糖代谢的情况。 例如： 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤，肝细胞内 都可聚集过多的糖原。 * PPT课件 ★ 过碘酸-雪夫反应 （periodic acid Schiff reaction， PAS) 原理： 用过碘酸氧化多糖结构的碳键， 使其形成2-醛基，与无色的品红结合生成 紫红色品红复合物，沉淀于细胞内糖原分布部位， 从而可证明多糖或粘多糖的存在。 * PPT课件 1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液： 过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中 （2）Schiff试剂： 双蒸水 200ml 碱性品红 1g 1mol/L 盐酸 20ml 偏重亚硫酸钠 2g （或亚硫酸氢钠） 活性炭 300mg * PPT课件 ※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。 * PPT课件 (3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳 5ml 1mol/L盐酸 5ml 蒸馏水 90ml 用前配制 (4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml 蒸馏水 914.4ml * PPT课件 2、染色步骤 （1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后，过蒸馏水。 （2）入Schiff 液10-20 min（室温 暗处） （3）入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min （去非特异性染色）流水冲洗10min，