课题2.土壤中分解尿素的细菌的分离和计数教学精品.pptVIP

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;3、常见的分解尿素的微生物;二.研究思路; 1、实例：;2、实验室中微生物的筛选原理：;15.0g;培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。;5、怎样证明此培养基具有选择性呢？;方法1、显微镜直接计数：;方法2.间接计数法（活菌计数法） ⑴常用方法：稀释涂布平板法。 ⑵原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长着一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。;注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以???的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。;分析课本P22:两位同学统计结果，回答书上问题;实例：;小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。;实验流程： 土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物培养→观察并记录结果→细菌计数。 ;二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 ;◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行;◆分离不同的微生物采用不同的稀释度;为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？;㈢.取样涂布;㈣.微生物的培养与观察;㈤.微生物的培养与观察;◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。;微生物的培养与观察;三.结果分析与评价 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。;三、课题成果评价;四.课外延伸 1.本课题只是对分解尿素的细菌进行了初步的筛选，对菌种进一步鉴定还需借助生物化学方法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂(酸性呈黄色、碱性呈红色、中性呈橙色)。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 2. 细菌数目的测定还可以通过 滤膜法;大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽;本课题知识小结:; 1.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素;3.下列说法不正确的是（ 　） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。 4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（　　） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐; 5.产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是 A．一个细菌，液体培养基 B．许多细菌，液体培养基 C．一个细菌，固体培养基 D．许多细菌，固体培养基 解析　菌落是一个或几个细菌的子细胞群体，在固体培养基上肉眼可见，是作为菌种鉴定的重要依据，若是多种细菌形成的菌落则不是标准菌落。 答案　C;例题解析 ;　　例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是 　　A．调整期 　B．对数期 　　C．稳定期 D．衰亡期;　　例3．（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代