海绵环肽Phakellistatin 13及类似物的设计合成与活性研究-生物化工专业论文.docxVIP

大连理工大学硕士学位论文摘 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 Phakellistatin 13是从我国永兴岛采集的海绵Pha妇llia fusca(Demospongiae纲， Axinellida目)中分离出来的环七肽，经鉴定结构为cyclo(-Leu-Trp-Pro．Phe．Gly．Pro．amr-)， 它对人肝癌细胞BEL．7404具有显著的细胞毒性，ED5010。pg／mL。 本文采用固相合成．环化裂解法，选用肟树脂为固相载体，以Thr(OBzl)为起始氨基 酸，25％TFA／DCM溶液为脱保护试剂，HBTU．HOBt·H20为缩合剂，合成了Phakellistatin 13；最终产率为31．6％。合成产物经HPLC、质谱、圆二色谱及核磁共振分析后证实与 文献报道的天然Phakellistatin 13结构完全一致。 为进一步研究Phkellistatin 13的构效关系，本实验采用Ala scan法对Phakellistafin 13 进行结构设计，即选用Ala依次代替PhakeUistatin 13环肽序列中的每一个氨基酸，得到 7种类似物，合成这些类似物并研究其活性，为进一步的结构设计和提高Phakellistatin 13 活性奠定基础。 对已合成7种环肽类似物以产率和纯度为标准进行比较，分析Phakellistatin 13序列 中不同的氨基酸残基对环肽合成的影响，结果表明Pro残基对Phakellistatin 13环化的贡 献最大；Leu残基的贡献最小。 将合成的产物作用于四种癌细胞：BEL．7404(人肝癌细胞)，MCF．7(人乳腺癌细 胞)，HT．29(人结肠癌细胞)和Hela(人宫颈癌细胞)，并使用MTT法进行体外抗 癌活性检测，结果表明Phakellistatin 13类似物1和5对多种癌细胞显示出相对较强的细 胞毒活性，各环肽对Hela细胞的生长抑制活性明显高于对其他细胞的活性。但各化合 物对四种癌细胞的均未显示出明显的抑制作用。 综合Ala scan的合成和活性筛选结果可知，Leu残基在Phakellistatin 13序列中对环 状结构的形成和生物活性的显示贡献最小，在以后的研究中，此位点可以进一步修饰， 以获得活性更高的化合物。 关键词：PhakelI istarin 13；固相合成；AIa scan法；类似物；抗癌活性 海绵环肽Plmkellistatin 海绵环肽Plmkellistatin 13及类似物的设计合成与活性研究 Solid Phase Total Synthesis and Cytotoxicity Studies of Phakellistatin 1 3 and Analogues Abstract Phakellistatin 13[cyclo(一Leu-Trp·Pro-Phe-Gly-Pro-Thr-)]，a cycloheptapeptide isolated from me at sponge Phakellia fusca Tlliele which collected Yongxing Island of China, exhibits potent cytot0)【icity against the hepatoma cell line BEI，7404(EDs010。2 I_tg／mL)． Phakellistatin 13 WaS synthesized by the SPS·CC method on Oxime resin starting from Thr(OBzl)．with 25％TFA／DCM for deproteetion and HBTU-HOEltH20舔coupling reagent, resulting in 31．6％final yield．The synthetic cyclic peptide WaS proved to be chemically identica]with the natulm counterpart by the ESIMS and NMR data． A structure-activity relationship investigation WaS continued by Ala SCan approach, which consists of也e systematic replacement of each amino acid residue in the peptide sequence by Ala，in order to investigate the role and relative importance of each amino a