利用LCQ-TOF进行亚ng级完整单克隆抗体定量分析.PDFVIP

利用 LC/Q-TOF 进行亚 ng 级完整单 克隆抗体定量分析 应用简报 作者 前言 Alex Zhu、David Wong 和 Aaron Boice 研究人员通常利用针对酶解样品的特征肽的靶向多反应监测 (MRM) 技术对生 物药物进行定量分析。尽管这项技术具有极高的分析灵敏度，但是它存在两个 明显的局限性：无法检测非预期分子形态以及样品处理过程中可能引入假象。 在完整蛋白质水平上进行定量分析可克服这些限制，但却要分别面临分析灵敏 度和重现性的挑战。本研究使用色谱技术的最新进展和高性能 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 建立了一种线性动态范围极宽的高灵敏度、高重现性定量 分析方法。 图 1. Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系统 实验部分 方法 试剂与化学品 表 1 总结了 Agilent 1290 Infinity II UHPLC 条件。所用的梯度方法中包括 0.9 分 曲妥单抗单克隆抗体 (mAb) 制剂标 钟的停流时间。表 2 总结了质谱仪条 准品购自基因泰克 (So. San Francisco, 件。SWARM 自动调谐用于优化大分 California, USA)。牛血清白蛋白 (BSA) 子传输和检测。 和甲酸 (FA) 购自 Sigma-Aldrich。 样品前处理 表 1. Agilent 1290 Infinity II UHPLC 条件 用含有 0.01% BSA (w/v) 和 0.1% FA 的去 液相色谱条件 离子水稀释浓度为 24 µg/µL 的糖基化 色谱柱 Agilent ZORBAX RRHD 300-Diphenyl 1.8 µm, 2.1 × 50 mm, 857750-944 曲妥单抗储备溶液，以覆盖 0.01 ng/µL 柱温 80 °C 至 100 ng/µL 的浓度范围。稀释比为恒 进样量 1 µL 定的 1:3.162 （10 的平方根），每个稀 Multisampler 温度 4 ºC 释浓度对应于动态范围的半个数量级。 多重清洗 90/10 ACN/H2O 30 s，然后在起始条件下保持 10 s 流动相 A) H2O，0.1% 甲酸 B) 90/10 乙腈/H O，0.1% 甲酸 仪器与软件 2 流速 0.500 mL/min