海风藤对淀粉样前体蛋白基因的抑制及其有效组分的筛选-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何 其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡 献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人 承担。 论文作者签名： 战偿囊 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅 和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本 学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：坐!壁 导师签名： 山东大学倾士学位论文海风藤对淀粉样前体蛋白基因的抑制及其有效组分的筛选 山东大学倾士学位论文 海风藤对淀粉样前体蛋白基因的抑制及其有效组分的筛选 研究生：姚俊英 导帮：德 行赣愚青教授 专业：z￡物化学与分子生物学 摘 要 阿尔茨海默病(Alzheimer’S Disease，AD)是一种中枢神经系统退行性疾病， 典型静瘸理变纯为静经纲貔国神经纾维缠结(Neurofibrillary Tangles，NFT)，享审缝 细胞问老年斑(Senile Plaques，SP)形成阱及神经元的减少。A B是老年斑的主要成 分。警物化学帮分子生物学研究证实§淀耪样蛋白(Amyloid t3一peptide，A§) 的生物合成弓降解的动态平衡破坏，怒AD发生发展的主要因素。 淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein，APP)由S一分泌酶和Y一分泌酶 依次水解形成A§。大爨研究表明高袭达APP可能在AD发病过程中起重要作用。 Downs综合征携带APP基因的三个拷砸，APP和A D表达爨较正常入高，40岁 以后都出现类似AD的病理改变。APP高表达可能gl起APP的异鬻代谢，增加A §42的产生，避而形成神经毒性A B沉积。 减少A B的j”生和沉积，增加其漩除，保持A肛魄动态平衡，成为匿前预防 和治疗AD的主要治疗策略之一。因此抑制APP的商表达，继而降低A B的产生 可熊成为治疗AD的有效手段之一‘。我们曾用Northern印记杂交证实中药海风藤 能够选择性抑制APPmRNA的表达。 本磷究应熙半定量RT-PCR方法泛实海腿藤能够降低APPmRNA表达，海风 麟对APPmRNA表达的抑制作用随药物浓度的提高和作用时间的延长而增强。此 外，选嗣APP多克隆摭体CT695，Western Blot涯瞬海鼹藤生药对APP蛋蠢溪弱 种同功异构体冉口表达均有抑制作用，以降低成熟APP751／770的袭达最显著。当 海蝇藤浓度为509／l时，对APP蕊蛋囊屡表达豹掺铡率霹达70％。套该漾遂约繁 二部分，我们以APP为靶标，用人神经母细胞瘤细胞SK．N，SH作为体外筛选体 系，半定量RT-PCR方法j(砉海疑藤分离缓分避行了有效缝分熬戆逡。嚣季孛分褒方 山东大学砸I学位论文法中，第一种方法海风藤有效成分被平均分离到了IIl—l、llI一2和III一3三个组分中， 山东大学砸I学位论文 法中，第一种方法海风藤有效成分被平均分离到了IIl—l、llI一2和III一3三个组分中， APP基因的表达量仅为阴性对照的1／4。第二种分离方法效率较高，有效成分主 要集中在两个分离组分中，组分II一3APP基因的表达量为阴性对照的20％，i 次试验均未检测到绍分1I一4APPmRNA的RT-PCR扩增产物，13一actin表达正常， 说明组分II一4含有海风藤抑制APP基因表达的主要成分。 总之，本试验的研究结果表明海风藤生药及其分离组分均能有效的选择性抑 制APP基因的表达。海风藤为AD的治疗提供了一种新的候选药物。 关键词阿尔茨海默病：淀粉样前体蛋白；海风藤；淀粉样蛋白 —～～一 —～～一 生垒查堂塑!．兰堡照苎 Haifengteng Negatively Regulates the Expression of the 13-Amyloid Precursor Protein Graduate：Yao Junying Tutor：Prof．Cui Xing，Han Enji Speciality：Biochemistry and Molecular Biology ABSTRACT Alzheimer’s di sease，a progressive neurodegenerative disorder of late life，it is characterized by deposition of叠-