细胞衰老与凋亡的表现2.PPT

第十三章 程序性细胞死亡与细胞衰老;教学目的：1． 掌握细胞衰老与凋亡的概念 2 ． 探讨细胞衰老及凋亡的机理教学重点： 1．细胞衰老与凋亡的表现 2 ．细胞衰老与凋亡的机理 教学难点：细胞衰老与凋亡的机理 ;考点分析;目录;要点综述;细胞凋亡是本章的重点内容。由于细胞凋亡在有机体生长发育过程中具有极其重要的意义，对它的研究受到了广泛的关注，是近几年来的一个研究热点。要求掌握细胞凋亡的研究进展，包括细胞凋亡的形态和生化特征、分子机制和检测方法等。;第一节 程序性细胞死亡;一、动物细胞的程序性死亡;在形态学上细胞凋亡的发生过程可分为3个阶段： 1 .凋亡的起始：细胞表面的特化结构如微绒毛消失，细胞间接触的消失，但细胞膜依然完整；线粒体大体完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形帽状结构等形态，沿着核膜分布。2. 凋亡小体的形成：核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞质膜所包围。细胞表面产生了许多泡状或芽状突起，逐渐形成单个的凋亡小体。3. 凋亡小体逐渐为邻近的细胞吞噬并消化;凋亡小体被邻近细胞吞噬而被清除的过程图解;左，正常胸腺细胞；右，凋亡胸腺细胞（注意凋亡小体）;2．生物学意义：细胞凋亡对于多细胞生物个体的正常发育，自稳态的维持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用。例如：蝌蚪尾的消失，骨髓和肠的细胞凋亡，脊椎动物的神经系统的发育，发育过程中手和足的成形过程。;3．细胞凋亡的检测方法;TUNEL法的实验原理;由于正的或正在增殖的细胞几乎没有DNA 的断裂，因而没有3-OH 形成，很少能够被染色。最终通过计数每张切片上不同视野中TUNEL阳性细胞的比例来判断细胞凋亡发生情况。该方法灵敏度较高，是目前决定凋亡的最常用方法之一，但价格较贵，且也存在非特异性染色的干扰。 ;彗星;诱导细胞凋亡的因子 1)物理性因子：包括射线（紫外线，射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等。 2)化学及生物因子：包括活性氧基团和分子，DNA和蛋白质合成的抑制剂，激素，细胞生长因子，肿瘤坏死因子?（TNF?），抗Fas/Apo-1/CD95抗体等。;细胞凋亡的方式分为Caspase依赖性的和不依赖于Caspase的凋亡 （1）Caspase家族 Caspase属于天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶，相当于线虫中的ced-3，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能选择性地切割细胞内的某些蛋白质，结果是使靶蛋白活化或失活，使细胞不可逆的走向死亡。;哺乳动物细胞Caspase家族共有15种： Caspase-1、4和11负责白介素前体的活化； Caspase-2，-8，-9，-10，-11负责凋亡的起始； Caspase-3，-6，-7是凋亡的执行者。;补充;（2） Caspase依赖性的细胞凋亡;Bcl-2为凋亡抑制基因， Bcl-2表达的蛋白是膜的整合蛋白，其功能相当于线虫中的ced-9。现已发现至少19个同源物，它们在线粒体参与的凋亡途径中起调控作用，能控制线粒体中细胞色素c等凋亡因子的释放。;（3） Caspase非依赖性的细胞凋亡;（4）生死抉择：细胞凋亡的调控;p53;（二）细胞坏死;DNA损伤和PARP活化导致增殖旺盛细胞发生“程序性”坏死;（三）细胞自噬;二、植物细胞与酵母细胞的程序性死亡;细胞凋亡与坏死(necrosis) 二者的主要区别是，细胞凋亡过程中，形成众多的凋亡小体（apoptotic bodies），凋亡小体则为邻近的细胞所吞噬。整个过程中，细胞质膜的整合性保持良好，死亡细胞的内容物不会逸散到胞外环境中去，因而不引发炎症反应。 相反，在细胞坏死时，细胞质膜发生渗漏，细胞内容物，包括膨大和破碎的细胞器以及染色质片段，释放到胞外，导致炎症反应。;区别点 ;第二节 细胞衰老;一、早期的细胞衰老研究;二、Hayflick界限;Hayflick通过对不同生物的胚成纤维细胞的体外培养，发现物种寿命和培养细胞寿命之间存在着确切的相互关系。举例? Hayflick巧妙的设计实验，进一步证明了决定细胞衰老的因素在细胞内部，而不是外部环境。取老年男性个体的细胞(分裂40次，间期无巴氏小体）和年轻女性个体的细胞（分裂10次，间期有巴氏小体）进行单独或混合培养，并统计其倍增次数。结果发现，混合培养中的两类细胞的倍增次数与各自单独培养时相同，即在同一培养液，当年轻细胞旺盛增殖的同时，年老细胞就停止生长了；;年轻细胞的胞质体与年老的完整细胞融合时，得到的杂种细胞不能分裂；年老细胞的胞质体与年轻的完整细胞融合时，杂种细