含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

鞭士蘸竞生攀往埝文英文缩略语 鞭士蘸竞生攀往埝文 英文缩略语 5．fluoroc硪osinc 5，氯髓啸碇 5-fluorouracil 5．氟屎嗡嗡 琏 AdCMV-Lacg 含拳巍耩萤酶摹敝辩豫襄鸯 Ampicillin 氨苄蒲襟索 base pair 骧蕊对 cytosine deaminase 稳跨踺耱鬣薅 铆topathic effect 鳃鼹爨鬻效寝 篇一呻盖焉斟 Dutbeeco’s Modified Eagie 改照Eagle熔葬纂 medium DMSO dimeihyl sulphoside =甲纂驻矾 嚣eGF endo堪elial eell growth faetcx 舞寝麓照生疑露子 ED礅 ethylenediammetetra acetic acid 乙：=鬣鞲乙酸 ES endostatin 内皮抑黎 FBS fetal bovineser,／m 齄孛袅游 GFP green fluorescent protein 绿色激光蛋白 Heta cen／cal cellcarcinoma ofhⅨ睦8雏 天褰颈撼缀溉 Kana kanamyein 卡那褥索 bB Luria-Balani medim LB蹬养莲 醚嚣 3一(4，5--dime蛳biazoy．2．yI)-2、5一 靼警纂鼹氮穗爨 diphenyt tetrazolium bromide OD optical出嘞 设巍液 pAdEasyd plasmid adeaovims Easy．t El获失骤瘸毒嚣繁蕊粒 pAdTrack-CMV 斑asmid adeaoviras Traek-CMV 带擐铸麓馥豹艨翁遵穿棱辩粒 pCR polymerasc chain reaction 多蒙酶链发您 pEZZ-tS-E$ pEZZd8 p鼬A gelle rased 客ES耩瓣静A骚爨鞋含罄溢 埘th ES geaB vector tAd reeomb／嚣antadonoviras 耋缀繇瘸毒 rAd-CD reeombinantadeaovirus*ElCMV 含有CD基阂的骥缎腺病帮 —￡D rAd-CDgly-ES recombinant adeaovhals-CDgb,ES含毒CDgl蟒S繁嚣鼢蚕缍艨病毒 RPMll640 RPIM meditna 1640 RPMll640墙嚣繁 SpS soditma dod∞yl salfate 卡二烧纂藏羧魏 SMMC+772l human hepatic∞lldar 人翳癌粼腿椿 e雄℃娃}0黼a鳓strain 772t Sire streptomycin 链霉鏊 TCIDso 50％tissue弱-altare infective dose半鼗维缓露瞧惑疑爨 TK flkymidine kmase 胸营激酶 { 顾j_研究生学位论文含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验 顾j_研究生学位论文 含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验 研究 摘要 本研究首先用PCR法从课题组构建的含cD基因的重组腺病毒(rAd—CD) 中扩增出cD基因，将其插入腺病毒穿梭质粒(pAdTrackCMV)，而后从含Es基因 的分泌型表达质粒DEZZ—18一ES中扩增出glyES基因，将两者融合构建成含 CDglyES融合基因的腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV—CD。然后转化大肠杆菌 BJ5183，构建出重组腺病毒质粒pAdTrackCMV—CDglyES，用卡那霉素筛选重组质 粒，用限制性内切酶酶切、PCR扩增和测序对插入基因进行鉴定。然后经脂质 体介导转染293细胞进行包装和扩增，借助报告基因监控和筛选重组腺病毒。 采用氯化铯密度梯度离心纯化病毒，用TCID。。法滴定其浓度。为了证实融合基 因CDglyES具有双重活性，进行了初步的体外抑瘤试验。将纯化重组腺病毒稀 释成l×10”TCID。／L，分别感染肝癌细胞株SMMC一7721和宫颈癌细胞株Hela 24 小时，给予前药5-FC，继续培养48小时后，检测肿瘤细胞生长抑制率；并与 对照重组病毒rAd．CD和rAd-LacZ的肿瘤细胞生长抑制率进行比较。结果显示 融合基因系统对SMMC-7721细胞的抑制率达78．2％，与rAd—LacZ／5一FC(52．2％) 系统比较有显著性差异，PO．01：融合基因系统(78 1％)和rAd—CD／5-FC系 统(77 7％)对Hela细胞的生长抑制率与rAd—LaeZ／5-FC系统(50．2％)比较有显著 性差异，pO 01；而rAd—CDglyES／5-FC系统和rAd·CD／5一FC系统比较无显 著性差异，pO 5。这一结果证实了CDglyES融合基因中，基