含硫化合物自组装技术的压电免疫传感器研究-分析化学专业论文.docxVIP

湖南大学硕士学位论文摘 湖南大学硕士学位论文 摘 要 ／ f压电传壁技巷因其灵敏度高、响应谱广、结构简单和成本低廉等特点已经被 推广应用于分析化学、生物化学、环境监测及分子生物学等众多领域。压电免疫 传感技术利用压电晶体与抗原抗体特异性免疫反应结合的特征，通常在压电石英 晶体表面先固定抗原(抗体)，响应溶液中抗体(抗原)引起的质量、密度和粘 度等性质的变化，它兼具有压电质量响应的高灵敏性和生物化学反应的高特异 性。其中，生物分子识别层即生物分子固定化技术是研制理想压电免疫传感器的 一个关键。通常将生物分子固定于石英晶体电极表面或石英晶体表面的惰性载体 涂层主要有直接固定法和间接固定法．包括有硅烷化连接法，聚合物膜连接法， 非特异性吸附蛋白间接固定法，LB膜技术，生物素．亲和素体系(BAS)法以藏 自组装单分子层(SAMs)技术等等。在许多情况下，这些方法还可联合使用。J『本 文结合生物分子固定化技术的新发展，设计了一些新的压电免疫传感器，着重于 开展含硫化合物自组装技术固定生物分子的压电免疫传感器的研究。在下述几个 方面取得了一些新的成果： I．提出了一种新的基于巯基化聚丙烯胺自组装固定化方法，以克服传统小分子 硫醇自组装膜生物相容性差的缺陷。应用偶联试剂碳二亚胺(EDC)和N．羟 基琥珀酰亚胺(NHS)使聚丙烯胺(PHA)与巯基丙酸(MPA)偶合形成巯 基化的聚丙烯胺，应用这一新方法，实现了羊抗人[gM抗体分子的固定，并 在O，66—26．4／xg／mL范围内对人血清免疫球蛋白IgM进行了测定。与巯基丙 酸自组装膜方法比较，应用该方法可在传感器表面固定更多的抗体分子，传 感器的响应灵敏度获得了显著提高。 2．提出了一种新的基于衍生化褐藻酸钠自组装膜固定蛋白的新方法，同样可以 克服传统小分子自组装膜生物相容性差的缺陷。f应用EDC和NHS使褐藻酸 钠与胱胺偶合形成衍生褐藻酸钠作新的自组装{!!『料，用于蛋白固定，应用这 一新方法，(1)实现了转铁蛋白抗体分子的固定，并对转铁蛋白参考血清进 行了测定，该方法可在O．08～25．7 J．tg／mL范围内对转铁蛋白进行测定。与巯基 丙酸自组装膜方法比较，该方法可在传感器表面固定更多的抗体分子，传感 器的响应灵敏度亦显著提高。(2)研制了用于测定补体c，成分的压电免疫传 感器，在O．072～21．6 gg／mL范围内对补体C，成分进行测定。同时对人血清 样品进行测定，将测量结果与酶联免疫吸附法(ELISA)进行对照，以F检 湖南大学硕士学位论文验法考察显示二者无显著性差异。该方法是一种很有潜力的免疫传感器抗原 湖南大学硕士学位论文 验法考察显示二者无显著性差异。该方法是一种很有潜力的免疫传感器抗原 抗体分子固定的新方法，将这种传感器初步应用于临床诊断，取得了满意结 果。， 3．应用自组装技术，在石英晶振金电极表面自组一带氨基的胱胺自组膜，再通 过戊二醛交联实现蛋白质分子的共价固定。运用此方法成功地固定了抗胰蛋 白酶抗血清，研制成一种基于胱胺自组装测定抗胰蛋白酶的压电免疫传感器， 并在0．23～23．9 Ixg／mL范围内测定了抗胰蛋白酶。 关键词： 压电免疫传基籍、 自组装疆术、生物分手固定化 II 湖南大学硕士学位论文A 湖南大学硕士学位论文 A B S T R A C T Piezoelectric sensing technique has been applied to many fields，including analytical chemistry,life science，environmental monitoring and surface sciences because of it’S small size，high sensitivity，simplicity,low power consumption and broad sensing spectrum．Piezoelectric immunosensors possess high selectivity provided by antibodies or antigens and sensitivity response directly to the mass change of proteins．Immobilization technologies of biomolecules are of paramount importance in order to preserve their biological activity．There are mang immobilization methods we can use directed or indirected．The use o