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水蛭化学成分研究 摘要：[目的]研究中药水蛭的化学成分。[方法]采用硅胶柱层析、SephadexLH-20等色谱方法进行分离纯化，依据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。[结果]从中药水蛭的95％乙醇提取物中分离得到9个化合物，分别鉴定为：吲哚－3－甲酸－β－D－吡喃葡萄糖苷（1）、3－吲哚－甲醛（2）、腺苷（3）、2－羟基嘌呤核苷（4）、尿嘧啶核苷（5）、腺嘌呤（6）、尿嘧啶（7）、黄嘌呤（8）和2－哌啶酮（9）。[结论]首次从该药材中分离得到9种化合物。 关键词：水蛭；化学成分；结构鉴定 中药水蛭为水蛭科动物蚂蟥（Whitmaniapigra）的干燥全体，具有破血通经、逐瘀消癥的功效，主治血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫以及跌打损伤等症[1]。水蛭的炮制方法《伤寒论》中有所记载，大致有净制、切、加辅料和不加辅料制几大类，十几种炮制方法。现代对水蛭的炮制大多采用酒制、滑石粉烫、砂烫等方法。水蛭的主要成分为大分子类化合物，主含蛋白质，含有17种氨基酸，水解氨基酸含量高达49.4%，包括人体必须的8种氨基酸[2]；还含有如水蛭素、肝素、组织胺、吻蛭素、氨基酸等；水蛭中也含有糖脂类、蝶啶类、甾体类和羧酸酯类等多种小分子类物质；此外微量元素主要含有Zn、Mn、Fe、Co、Cr、Se、Mo、Ni等14种微量元素。水蛭具有抗细胞凋亡、抗肿瘤、抗凝、抗血栓、抗炎、抗纤维化等药理作用[3-7]。随着水蛭的人工培养和环境的变化，水蛭的化学成分研究一直是科研工作者的研究热点和难点。所以，为进一步充分利用和开发中药水蛭，丰富水蛭药材的化学成分组成，为水蛭的药效学研究提供科研数据，本实验对中药水蛭的化学成分进行了系统研究，从中分离并鉴定了9个化合物，分别为:吲哚-3-甲酸-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、3-吲哚-甲醛（2）、腺苷（3）、2-羟基嘌呤核苷（4）、尿嘧啶核苷（5）、腺嘌呤（6）、尿嘧啶（7）、黄嘌呤（8）和2-哌啶酮（9）。所有化合物均为首次从该药材中分离得到。 1仪器与材料 brukerAV-300MHz核磁共振波谱仪（瑞士bruker公司）;Agilent6210LC/MSDTOF质谱仪（美国Agilent公司）;Agilent-1260分析型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）;Agilent-1260制备型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；薄层层析用硅胶GF254薄层预制板（烟台化学工业研究所）；柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂），SephadexLH-20（Pharmacia公司），ODS柱层析材料（德国Merck公司）；高效液相色谱及质谱仪分析使用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。水蛭药材于2011年3月购于广东省清平药材市场，由暨南大学药学院周光雄教授鉴定为水蛭科蚂蟥的干燥全体。药材标本（编保存于暨南大学中药及天然药物研究所。 2提取与分离 干燥的水蛭全体4kg粉碎后用95%乙醇在80℃下回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，得到总浸膏460g，将总浸膏用适量水混悬后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到相应部位的萃取物。乙酸乙酯萃取物（40g）经硅胶柱层析，氯仿/甲醇（100∶0-1∶1）梯度洗脱，经TLC分析合并，得到9个馏分（Fr.1-6）。馏分Fr.2（3.2g）进一步经硅胶柱层析分离及SephadexLH-20凝胶柱（氯仿-甲醇）分离纯化得到化合物1（9.3mg）、2（5.3mg）。馏分Fr.3（9.7g）经ODS柱层析，甲醇/水（40∶60-100∶0）梯度洗脱，TLC检测，得到4个馏分Fr.3.1~Fr.3.4。Fr.3.2经SephadexLH-20凝胶柱分离纯化得到化合物3（6.3mg）、4（7.2mg）。Fr.3.3（300mg）经高效液相色谱制备，以甲醇/水（60∶40）为流动相，分离纯化得到化合物5（6.5mg）、6（5.9mg）、7（8.1mg）。馏分Fr.5（3.7g）经ODS柱层析，甲醇/水（40∶60-100∶0）梯度洗脱及SephadexLH-20凝胶柱（氯仿-甲醇）分离纯化得到化合物8（6.6mg）、9（5.9mg）。 3结构鉴定 化合物1：淡黄色油状物。UV（MeOH）λmax:212、228、282nm。ESI-MSm/z346[M+Na]+,分子式为C15H17NO7;1H-NMR（300MHz,CD3OD）δ:8.10（1H,m,H-4）,8.07（1H,s,H-2）,7.46（1H,m,H-7）,7.22（1H,m,H-6）,7.20（1H,m,H-5）,5.74（1H,d,J=7.9,H-1′）,3.88（1H,dd,J=12.1,1.9Hz,H-6′a）,3.72（1H,dd,J=12.1,4.6Hz,H-6′b）,3.54（1H,m,H-2′）,3