甲基化相关基因对植物抗双生病毒的影响初探-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 DNA methylation-mediated plant resistance to geminivirus infection Author’s signature: Supervisor’ s signature: External Reviewers: Examining Committee Chairperson: Examining Committee Members: Date of oral defence： 杭州师范大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得杭州师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用 过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解杭州师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权杭州师范大学可以将 学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或 扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 杭州师范 杭州师范大学硕士论文 致谢 致谢 感谢我的指导老师施农农教授，这三年的研究生生活是我人生的转折点也是关键 点，非常感谢施老师能够给我机会走入科研的殿堂，校园生活和科研技术的学习让我 不断的挑战自我、突破自己，为实现人生的价值打下坚实的基础，感谢施老师三年来 对我的科研，学习，生活方方面面的关心。 感谢我的合作导师洪益国教授，感谢洪老师为我提供了这个良好的平台，本课题 的课题的选题和实验设计都是在洪老师的指导下完成，感谢洪老师培养了我的科研思 维和能力。 感谢秦诚老师和赖童飞老师，感谢你们在实验过程中给我的悉心指导，更要感谢 你们在我实验遇到挫折的时候给我的鼓励，让我有坚持下去的勇气。感谢研究中心的 俞志明老师、陈微微老师、王春老师、谭金娟老师，感谢你们在科研和生活中给予我 的帮助和关心。 特别感谢我的师兄李彬、章鹏程，师姐陈芝娟，感谢你们在科研、学习和生活过 程对我的关心和帮助，感谢师姐胡凤和沈佳佳，同窗何梅玲和孔俊花，师妹、梅凤玲、 汪莹、程琳茗、胡逸华、王慧、樊亚亚和师弟吴超群，感谢你们的帮助和陪伴。 感谢我的母校，杭州师范大学，给我提供良好的学习生活环境。 感谢这一段美好的时光，感谢每一缕阳光，每一个微笑，每一丝的善意和温暖。 2015 年 3 月于杭师大 I 杭州师范 杭州师范大学硕士论文 摘要 摘要 双生病毒（Geminiviruses）是一类基因组为环状单链 DNA 的植物病毒，可以对世 界范围内的许多重要经济作物引起毁灭性病害，给人们带来巨大的经济损失，双生病 毒得名于它们病毒颗粒的特殊形态,由两个不完整的二十面体组成双联体结构，一般由 昆虫介体传播。 DNA 甲基化是一类非常重要表观遗传修饰，指在甲基转移酶的催化下，从特定供 体上,将甲基转移到特定的碱基上的过程。主要发生在真核生物中胞嘧啶的第五位碳原 子上。DNA 甲基化在转录水平基因沉默介导的防御外源 DNA 入侵中发挥重要作用。 本次实验，我们选取了 5 个在病毒防御途径中起到重要作用的基因构建超表达载 体，使用农杆菌介导的植物转基因转入本氏烟，每个基因都获得了若干株系，其中三 个基因为甲基化酶的编码基因，目的基因所编码的三个甲基化酶分别是：建立从头甲 基化的结构域重排甲基化酶 DOMAINS REARRANGED METHYLTRANSFERASE 2 (DRM2)，分别维持对称的 CG、 CNG 位点和不对称位点 CHG 上的甲基化的 DNA METHYLTRANSFERASE1 (MET1) 、 植 物 特 有 的 甲 基 化 维 持 蛋 白 CHROMOMETHYLASE 3（CMT3），其余两个基因是组蛋白 H3 的编码基因和 RNA 依 赖性 RNA 聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase，RDR)家族中的 RDR6 的编码基因。 同时，本次实验还将五个目的基因与 GFP 片段融合后插入在载体中，使用农杆菌 介导的基因瞬时表达技术，在本氏烟中瞬时表达目的基因与 GFP 的融合蛋白，完成这 五个基因在植物中的亚细胞定位，并使用农杆菌介导的植物转基因技术转入本氏烟， 便于后续实验中对目的基因功能的分析。 组蛋白 H3 基因可与双生病毒的多个蛋白互作，拟南芥中 H