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食品致病微生物最新檢測方法介紹 組員：洪碩蓮、黃建元、楊至平、閻瑩潔 報告學生： 報告日期： * 內容大綱 食品汙染主要菌株 p3-5 傳統檢驗方法 p6-7 生物晶片 p8-11 分類 基因晶片 p12-26 組成 製造過程、條件 作業流程 優、缺點 應用 海內外晶片公司 p28 參考資料 p29 * 前言 民國70年至93年，台灣地區食品中毒事件案例前六名依序為： 腸炎弧菌 (Vibrio parahaemolyticus) 金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 仙人掌桿菌 (Bacillus cereus) 沙門氏菌 (Salmomella spp) 病原性大腸桿桿菌 (pathogenic E. coli) 肉毒桿菌 (Clostridium botulinum) * 表一、民國70 年至93 年台灣地區食品中毒案件病因物質分類表 病因物質/年別 70~79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 總計 腸炎弧菌 144 12 20 25 35 46 105 160 102 75 84 52 86 82 64 1092 沙門氏菌 23 3 3 0 5 8 9 4 5 7 9 9 6 11 8 110 病原性大腸桿菌 40 0 4 0 2 7 1 0 0 0 1 0 0 0 0 55 金黃色葡萄球菌 96 23 18 24 13 12 7 14 3 6 11 9 18 7 9 281 仙人掌桿菌 44 13 15 12 12 11 7 15 12 12 5 8 4 11 7 188 肉毒桿菌 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 7 其他 4 1 0 2 0 4 1 0 0 0 0 3 1 0 0 19 細菌總計 299 42 49 54 62 75 122 177 114 91 116 78 111 105 88 1583 單位：案件 資料來源：衛生署食品資訊網 .tw/chinese/chinese.asp * 歐美國家，由沙門氏菌以及金黃色葡萄球菌所引起之食物中毒案件急速增加。 日本，由沙門氏菌、腸炎弧菌及仙人掌桿菌所引起之食物中毒案件亦受到相當的重視。 * 傳統檢驗法 預培養 (preculture) 選擇性培養基培養 (selective medium culture) 生化型鑑定 (biotype test) 血清型鑑定 (Serotype test) DNA 探針 PCR fingerprinting multiplex-PCR DNA定序 PCR-RFLP gene-specific probe hybridization ribotyping * 傳統檢驗法-缺點 耗時長 操作大量樣品時方便性不佳 無法同時鑑別不同種屬的菌株 目前PCR技術的缺點，是對於不同的目標基因或目標菌必須要用不同的引子組進行檢測。在目標菌種不明確時，如何選擇適當的引子組即是一個問題，而造成檢測上因難。 * 生物晶片 在玻璃、矽片、塑膠或其他材質上，利用微電子、微機械等精密技術，製成應用於基因表現、基因序列或生物化學分析。其作用對象可以為基因、蛋白質或細胞組織等。 * 基因晶片 (gene chip) 生物晶片 微流體晶片 (microfluidics) (Lab-on-a-chip) 蛋白質晶片 (protein chip) 檢測型晶片 (微陣列晶片) 處理型晶片 (微處理型晶片) 在微面積的基質上，種植高密度的生物探針做為大量篩檢及平行分析的工具。具備快速、方便、經濟、省時等特性，適用於大量基因表達、篩檢、比對等研究，可應用在病原體基因檢測、基因表現比較、基因突變分析、基因序列分析、及新藥物開發等領域。 處理生物樣品、進行生物性反應、或分析生物體之工具。樣品前處理晶片可用來處理血液、組織、植物等樣品，減少人為操作時，可能產生的危險和污染