第三章 外植体的选择和灭菌.ppt

复习题： 培养基的成分包括哪几类？各有何作用？ 在培养基成分中什么决定着外植体发育方向？ 抗生素的作用是什么？ 配制MS培养基时，琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？ 第三章 外植体的选择和灭菌 1 外植体部位 植物体的各个部位，如茎尖、茎段、皮层及维管组织、髓细胞、表皮、块茎的贮藏薄壁细胞、花瓣、根、叶、子叶、鳞茎、胚珠和花药等。 不同种类的植物以及同一植物的不同器官对诱导条件反应不一致的。 大多数植物来说，茎尖是较好的部位，其形态已基本建成，生长速度快，遗传性稳定，是获得无病毒苗的重要途径。 外植体选择的原则 培养材料的来源是否保证是否会引起不良变异。 叶片的来源最有保证，许多植物的组织培养以叶片为外植体。 对一些培养较困难的植物，可以通过子叶或下胚轴来建立其组织培养再生体系。 3 器官的生理状态和发育年龄 植物上部器官的生长时间虽短，其生理年龄却较老，更接近发育上的成熟，越容易形成花器官。而越向基部，则生理年龄越小。 下部组织越易形成营养器官，上部组织易形成花器官。 通常年幼组织比年老组织有较高的形态发生能力，容易培养，有较大的再生能力。 第三章 外植体的选择和灭菌 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 第三章 外植体的选择和灭菌 第一节 外植体的选择 第二节 外植体的灭菌方法 第三节 污染原因和预防措施 1.1 污染的原因： 从病源菌方面：主要有细菌及真菌两大类； 从污染的途径： 外植体带菌 培养基 器皿灭菌不彻底 操作人员未遵守操作规程等引起的。 污染后的措施 发现污染的材料应及时处理，否则将导致培养室环境污染。 对一些特别宝贵的材料，可以取出再次进行更严格的灭菌，然后接入新鲜的培养基中重新培养。 要处理的污染培养瓶最好在打开瓶盖前，先集中进行高压灭菌，再清除污染物，然后洗净备用。 2 污染的防治措施 2.1 防止材料带菌的措施 2.2 外植体的灭菌 2.3 玻璃器皿的灭菌 2.4 金属器械的灭菌 2.5 布质制品的灭菌 2.6 无菌操作室的灭菌 2.7 操作 （2）选择合适的时间去田间采取外植体 避免阴雨天去田间采取外植体。 在晴天采取外植体时，下午采取的外植体要比早晨采的污染少，因材料经过日晒后可杀死部分细菌或真菌。 但目前对材料内部污染还没有令人满意的灭菌方法。 在菌类长入组织内部时，不要去年生的鳞片，甚至要除去韧皮组织，只接种内部的分生组织，可以收到一定的防污染效果。 （2）多种药液交替浸泡法 对容易污染而难灭菌的材料： 2.3 玻璃器皿的灭菌 湿热灭菌法——即将玻璃器皿包扎后置入蒸汽灭菌锅中进行高温高压灭菌，灭菌时间可延长达25min—30min。 干热灭菌法——即将玻璃器皿置入电热烘箱中进行灭菌。 煮沸灭菌——即将玻璃器皿放入水中煮沸进行灭菌。 2.4 金属器械的灭菌 火焰灭菌法：即把金属器械放在95%的酒精中浸一下，然后放在火焰上燃烧灭菌。 这一步骤应当在无菌操作过程中反复进行。 干热灭菌法：即将拭净或烘干的金属器械用纸包好，盛在金属盒内，放在烘箱中灭菌。 2.5 布质制品的灭菌 湿热灭菌法：工作服、口罩、帽子等布质品均用湿热灭菌法，即将洗净晾干的的布质品，放入高压锅中，用1.1公斤/厘米2 （即15磅/英寸2），121 ℃的温度，灭菌20 min～30min。 2.6 无菌操作室的灭菌 无菌操作室的地面、墙壁和工作台的灭菌可用2%的新洁尔敏或70%的酒精擦洗，然后用紫外灯照射约20min。 使用前用70%酒精喷雾，使空间灰尘落下。 一年中要定期一、二次用甲醛和高锰酸钾熏蒸。 防止操作带来的污染 A、整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速 B、接种过程中尽可能达到悬空要求 C、接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口 小结：常用的灭菌方法 不耐热的物质的过滤灭(除)菌 一些生长调节剂(赤霉素、玉米素)、某些维生素是不耐热的，常用过滤灭菌-细菌过滤器方法。 防细菌滤膜网孔的直径为0.22-0.45μm以下，可阻止细菌细胞和真菌的孢子通过。 小 结 第一节 外植体的选择 ：优良种质、健壮植株 、最适的时期、适宜的大小。 第二节 外植体的灭菌方法：常用灭菌药剂的使用及其效果 、外植体的灭菌方法。 第三节 污染原因和预防措施：污染的原因、污染的预防措施（防止材料带菌、外植体的灭菌、器皿与金属器械的灭菌、布质制品的灭菌、无菌操作室的灭菌、操作人员在接种时一定要严格按照无菌操作的程序进行）。 复习 思 考 题 在组培中如何做好外植体的选择工作 ？ 用于外植体灭菌的常用药剂有哪些 ？各其的特点如何？ 组培中污染的原因是什么？如何预防？ 正 确