基质金属蛋白酶及其抑制剂在幼鼠细菌性脑膜炎中的试验研究-儿科神经专业论文.docxVIP

山东大学博士学位论文基质金藩蛋白酶及英抑制剂在幼鼠细菌憔 山东大学博士学位论文 基质金藩蛋白酶及英抑制剂在幼鼠细菌憔 脓膜炎中的试验研究 专 业 儿科神缀 游毫骚突嫩 髑；蚤涪 博士生导师 孙若鹏 中文摘要 磺究鹜爨 基质金属瑕白酶(matrix metalIoproteina8e，MMP)系(MMPs)的 发现滚予对青蛙发育审形体交传原嚣黪探求。1962年，Gross等久将降 解蝌蚪尾巴的朱知活性物质定义为“胶原酶”，至今该家族中有20余种 特异性成员褥到了确认。根攒他们禳据功能和作用底物的鞯点不同可分 为四种驻类：胶原酶、明胶酶、基璇溶勰紊和膜型MMP，其中，明胶 酶根据其结构和分予凝的不阐义分为基质会属蛋白酶2(MMP．2)和基 震金属缓鑫酶9(MMP．9)。 细胞外基质(excetral cellular matrix，ECM)成分的合成与降解保 特着动态孚袋，MMPs冬其内滚槛{臻潮裁tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP)‘的动态平衡对保持ECM的完熬性、调节细 施与环境的关系方面其有重瑟作用。璇已发蠛圈释驻鍪TIMp(TIMP-l， 2，3，4)，TIMP可选择性与MMPs结合从而抑制其活性。由于内源性 TIMP对MMP8各亚搿的选择性较麓，疆诧人工合成的MMPs抑制剂受 到关注。曩翦报道的人工合成的MMPs抑制剂有10多种，都只威用于 动物试验中，GM6001是其中～种，主要抑制MMP-2和MMP一9的活 性。 生理状态下，MMPs主瑟参与缀织发育、伤口愈合、骨生长及血管 生成等。孛褪摔经系统肉麓MMPs来宣串经粒绸戆、荻凌缨蕤、发赛 过程中的小脑崖形细胞、神缀元以及血管内皮细胞等，在中枢神羧系统 发育谶程中，MMPs岛神经究生长、脑肉斑篱再生和小脑发育串鬟形缨 山永大学博士学位论变稳璜生移行寄荚。瘸璞祭锌下，MMPs粼麓援避诲多疾痿豹发生、发装， 山永大学博士学位论变 稳璜生移行寄荚。瘸璞祭锌下，MMPs粼麓援避诲多疾痿豹发生、发装， 如肿瘤的侵袭和转移，动脉粥样硬化及多发性硬化、阿尔淡海默瘸、恶 性胶震瘤等中糕神经系统疾瘸。近年来MMP-2、MMP．9在藏损侮孛豹 生物学作用臼趋受到幂斗学家们的关浪，已有报道MMP．2、MMP一9的活 性在脑中风发作后明驻升高，动物试验也显示局部脑缺盘荫MMP*9在 早期即被激活，MMPs辛臻割剂在外伤性脑损伤动物试验中的神经保护作 用也得铡肯定。但是MMP．2、MMP。9与细菌感染所致的炎症性脑损伤 鹣关系及其掇测YJ GM6001怼受性熬擐亵是否具毒僳护{乍月邋不清楚。 另一方面，细菌性脑膜炎是儿科常见的中枢神经系统感染性痰病， 尽管赣豹、强裔力数撬生素不断润毽瓣应焉戳及支持往医疗整护袋整数 提高，使死亡零有所下降，但存活者神经系统后遗瘫的发生率仍尉高不 下。细藩进入巾枢神经系统簌，它锻的繁殖麓发了宿主复杂鼢反应，露 健血脑屏障破坏以及糕体或髑部缺皿的脑啦管炎性改变，最终导致功能 性和结构性的脑损伤 (癫痫、智力低下和肢体瘫痪)。我稻推测在细 蘧性熬膜炎对霹能寄基质金麟蛋鑫酶的改变，其改变可能与细胞躐予有 关联，基质金属蛋白酶抑制剂GM6001可能具有神经保护作用。这些 润踅郝骞铸予漂谗积磷究。 目的 遁j璧建立幼龄大鬣耱炎链球蓥貔貘炎穰鍪，蹿缁薤性藏貘炎簸按秘 的发瘸机制进行探讨。在此旗础上，研究肺炎链球菌脑膜擞时基质金属 蛋白酶的交纯特点积幼大藏肺炎链球菌脑貘炎不潜对阉虑脑蕴缓串基 矮金属蛋白酶MMP．9、细胞因子TNF．a mRNA及脑脊液中二者怅度的 变化，并探讨基质金属蛋自酶抑制剂GM600t对删P一9和TNF—n的影响 捧薅。麓察缎慧性藏膜炎拜毒麓质金摄蛋自酶(MMPs)抑铡荆GM6001 对神经元损伤的保护作用。 方法 1．鼠龄为2l天的wistar大鼠(山东犬学动物中心)72只t随机 分为试验维(64哭)衽对照缝(8炎)，试验组器壤据不闲静姓笼霹阗 分为6个小缀，分别为接种后24小时组、48小时组、72小时组和第 lO、20、30最组，24小时缀又撮据接种细麓的浓魔分为3小组：3×104 2 山东大学博士学位论文cfu组、 山东大学博士学位论文 cfu组、 3×105 cfu组、 3×106cfu组。每个小组8只大鼠。48小时 组、72小时组和第10、20、30天组，接种细菌的浓度为3×104 cfu。 通过不同时间点处死动物，观察其临床症状和脑组织病理改变。 2．建立幼大鼠脑膜炎模型，24小时后观察临床表现并取脑脊液培 养；HE染色观察脑膜炎症反应；用逆转录一聚合酶链反应法测定MMP一9 和MMP-2mRNA表达：用免疫组化法观察MMP一9和MMP一2的蛋白定位及表 达：用SDS—PAGE明胶酶谱学测定