基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在糖尿病小鼠视网膜组织中的表达-眼科学专业论文.docxVIP

中文摘要基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在糖尿病小鼠 中文摘要 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在糖尿病小鼠 视网膜组织中的表达 摘 要 目的：近年来的研究认为，细胞外基质(ECM)的代谢异 常参与了糖尿病视网膜病变的病理过程。基质金属蛋白酶 (MMP)及其组织抑制剂(TIMP)在细胞外基质代谢中起 着重要作用，二者的调节平衡有利子维持视网膜的正常生理 功能，与糖尿病视网膜病变的发生发展密切相关。本实验通 过定性和半定量分析糖尿病小鼠视网膜组织中MMP一2、 MMP．9及TIMP．2的表达情况，并同时观察糖尿病小鼠视网 膜毛细血管及其基底膜的超微结构改变，旨在对基质金属蛋 白酶及其组织抑制剂在糖尿病视网膜病变发生发展巾的作 用及其作用机制进行探讨，为临床预防、治疗糖尿病视网膜 病变提供更为确切可靠的理论依据。 方法：选用从日本≮7岁予吉富会社引进C57BL／KsJ db／db糖尿病小鼠，无菌条件繁殖，清洁柜内饲养，保持环 境安静，温度26+2[3，12小时光照／12小时黑暗循环，自由 摄食、饮水。选用6周龄db／db小鼠24只，雌雄／1i限，其 db／+型同性同窝瘦型鼠为对照，分别在2、6、9、12川龄时 随机选择db／db小鼠及db／+d、鼠各6只，20％巴比妥钠腹腔 注射麻醉后，摘除左眼球，迅速取视盘侧距视盘约1 mill处 的1mm2面积大小的视网膜组织固定于2．5％的戊二醛磷酸 缓冲液中(PH7．6)，制作透射电镜样品，用透射EU镜观察视 网膜毛细血管基底膜的形态学改变；同一眼球的其余视网膜 中文摘要 中文摘要 组织后固定于4％多聚甲醛中，石蜡包埋，制成组织切片， 行HE和免疫组织化学染色，用计算机一图象分析仪对糖尿病 小鼠视网膜神经节细胞层和内核层中MMP．2、MMP．9和 TIMP．2的表达情况进行平均灰度和面密度分析。(注；平均 灰度值越低，说明免疫组化信号越强；面密度值越高阳性目 标面积越大，相应的阳性细胞数越多。)同时光镜下观察 MMP．2、MMP．9和TIMP．2在视网膜各层的表达情况，并对 其进行免疫定位。实验数据用SAS软件处理，组间比较用方 差分析，若有显著性差异，两组问比较用q检验。 结果：糖尿病小鼠与对照组小鼠相比，普通光镜下，糖 尿病组小鼠与对照组小鼠相比视网膜各层细胞形态结构未 见异常，而且在电镜下视网膜毛细血管及其基底膜的超微结 构亦未见异常。但随病程进展，糖尿病小鼠视l列膜毛细血管 基底膜进行性增厚，内皮细胞胞质发出指状突起突向管腔。 MMP一2、MMP．9及TIMP．2在正常对照组小鼠和糖尿病组小 鼠视网膜的神经节细胞层和内核层的细胞及血管内皮细胞 均有阳性表达。但随着病程进展，糖尿病小鼠视网膜神经节 细胞层和内核层MMP一2和MMP．9表达的平均灰度值有漫著 性升高(p0．05)，面密度值显著性降低(p0．05)。按2、6、 9、12月组，MMP．2的平均灰度值依次为：105．64-0．9， 120．74-2．6+，131．64-3．0“，143．74-2．0叫；MMP一2的面密度值依 次为：0．09545士0．00714，0．075244-0．00602’，0．05489+0．00613“， O．033414-0．00353蚓。。按2、6、9、12月组，MMP．9的平均 灰度值依次为：192．74-2_3，174．24-2．5’，160．94-3．2～， 145．8+3．7叫；MMP．9的面密度值依次为：0．129234-0．00522， 0．106964-0．00676‘，0．091934-0．00334’”，0．075984-0．00205一。 中文摘要随病程进展，TIMP一2表达的平均灰度值有显著性降低 中文摘要 随病程进展，TIMP一2表达的平均灰度值有显著性降低 (p0．05)，面密度值显著性升高(p0．05)。按2、6、9、12 月组，TIMP．2的平均灰度值依次为：153．0+5．6，145．1+4．3+， 136．7士4．1“，120．5士3．8螂；TIMP．2的面密度值依次 为 ：O．05339土0．004 1 9， 0．07354士0．00394+， 0．09790 土 0．00943“，0．11047+0．01848螂{。 同一病程阶段的 MMP．2／TIMP．2的平均灰度值的比值随着病程进展明显升高 (p0．05)，而其面密度值的比值随着病程进展明显降低 (p0．05)。按2、6、9、12月组，MMP一2／TIMP一2的平均灰 度值比依次为：0．692+0．0259，0．832i0．0168’，0．963j：0．0130”， 1．i79士0．0405w；MMP．2厂rIMP．2的面密度值比依次为： 1．789+0．0493，1