基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用-内科学专业论文.docx

博士论文基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移 博士论文基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移 植肾病中的表达及作用 中山大学附属第五医院肾内科 博士研究生：史艳玲 导师：邹和群教授 摘要 研究背景 由于肾移植外科技术的日臻完善及新型免疫抑制剂的临床应用，移植肾的短 期存活率显著提高，但是移植肾的长期存活率并没有明显改善。慢性移植肾病 (chronic aUograft nephropathy,CAN)是导致移植物晚期失功(移植一年以上二) 的主要原因，大约50％的移植肾功能丧失由CAN而致，因此，如何防治CAN 而改善移植肾的长期预后成为肾移植界研究的热点。 近期研究发现多种免疫性和非免疫性因素参与了慢性移植肾病的发生，但有 关慢性移植肾病的发病机制尚不清楚。已知单个核细胞浸润、血管平滑肌细胞向 内膜移行和增殖是慢性移植肾病早期病理变化中两个关键环节。而在肿瘤、妇产 科疾病等其他疾病的研究中发现，MMPs／TIMPs与炎症细胞、血管平滑肌细胞、 肿瘤细胞等浸润和迁移的发生机制有关。CAN后期肾组织发生纤维化，其本质 是ECM在肾小球和间质的异常堆积，导致肾毁损，有效肾单位丧失，‘肾功能进 行性下降。己知ECM堆积是由于合成增加、降解减少或二者共同作用的结果， 博士论文基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用基质金属蛋白酶是ECM降解的关键酶类。因此推测MMPs可能参与了慢性移植 博士论文基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用 基质金属蛋白酶是ECM降解的关键酶类。因此推测MMPs可能参与了慢性移植 肾病的发生发展。 正是由于单个核细胞浸润是CAN早期病理改变突出特征之一，而炎症细胞 浸润及其活化需要趋化因子的参与，提示我们有必要研究RAM阻S和MCP．1在 CAN发病机制中的作用。 实验方法 1．实验设计：分移植组(40只)、F344对照组(25只)、Lewis(25只)对照组三 组，每组分别于4周、8周、12周、16周和24周收获动物，移植组每次收获8 只、对照组每组每次收获5只。 2．利用显微外科技术制作大鼠慢性移植。爵病动物模型，观察其功能学变化 和形态学变化。 3．应用免疫组化技术、逆转录聚合酶链反应检测慢性移植肾病大鼠发病不 同时相肾组织中MMP．2、MMP．9、TIMP．1和TIMP．2基因和蛋白水平的表达， 探讨其表达变化与慢性移植肾病的关系。 4．应用免疫组化技术检测大鼠慢性移植肾病进展各时间点RANTES和 MCP．1的表达，并观察其与MMPs恻Ps表达的关系。 5．应用RT-PCR技术检测肾移植高脂血症患者外周血RANTES及其受体 CCR5mRNA的表达，探讨其与高脂血症的关系。 结 果 1．成功建立大鼠CAN模型：移植组24h尿蛋白定量从移植16w开始明屁增 高，与该时间点对照组相比差异有显著意义；16w后移植组各时间点尿蛋白定量 均显著高于前一时间点：CAN早期(4周)以单个核细胞浸润为主；16w后纤维 化逐渐明显。 2．移植组MMP．9蛋白及mRNA表达水平在慢性移植肾病早期(4w)均增 高，16w和24w时表达水平减低。TIMP．1蛋白及mRNA表达水平在4w减低， 12w以后增高。MMP．9／TIMP．1比值在慢性移植肾病早期(4w、8w)增高，12w 开始降低。 3．移植组MMP．2蛋白和mRNA表达水平在4w、8w时减低，12w后网复， 但与同组相比16w以后再次减低。TIMP．2蛋白和mRNA表达水平在16w以前 Ⅱ 博士论文基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用 博士论文基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在慢性移植肾病中的表达及作用 均增高，24w与同组相比水平减低。MMP．2／TIMP一2比值在CAN各时相均减低 但与同组相比16w后呈减低趋势。 4．移植肾组织RANTES表达在移植后12w增高，然后降低。 5．移植肾组织MCP．1表达在移植后4w、8w、12w显著高于F344对照组， 16w、24w显著低于F344对照组。 6．蛋白水平RANTES、MCP．1的表达与MMPs／TIMPs系统密切相关。 7．血脂正常组和血脂增高组外周血RANTES及其受体CCR5 mRNA表达水 平都显著增高，血脂增高组表达水平又明显高于血脂正常组。辛伐他汀治疗后 RANTES和CCR5 mRNA表达水平显著降低。 结 论 1．本研究成功建立了慢性移植肾病大鼠模型并以此进行慢性移植肾病发 病机制的研究。 2．移植后早期增高的MMP．9表达水平以及MMP一9／TIMP-1比值，参与CAN 早期单个核细胞浸润发病机制：后期减低的MMP一9表达水平以