基质金属蛋白酶在动脉粥样硬化及其相关疾病中的意义-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

上海第二医科大学博士学位论文摘 上海第二医科大学博士学位论文 摘 要 目的及背景：心脏病己成为威胁人类健康和生命的首要因素，常见的心血 管疾病中，冠心病则占有非常大的比例。因此，研究动脉粥样硬化的发病机制， 并努力找到干预其机制的方法，对冠心病防治有着非常重要的意义。血脂异常 是动脉粥样硬化等疾病的重要危险因素，而其中氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoproteixa，OX-LDL)已被确认为致动脉粥样硬化的脂质成分。凝 血酶(thrombin)是多功能的丝氨酸蛋白酶，具有与血管壁生物学高度相关的 多细胞激活的功能，研究表明凝血酶能通过特异受体在损伤、血栓形成和动脉 粥样硬化中起着重要作用。流行病学资料表明，糖尿病患者发生动脉粥样硬化 及危及生命的心血管并发症的危险性较常人高3-4倍。高糖不仅能直接引起糖 尿病的典型症状，而且可以诱导和促进多种细胞因子表达，从而促发一系列病 理生理过程，最终产生多种心血管并发症。血管细胞外基质的分解与重塑在动 脉粥样硬化形成和进展过程中起着重要作用，细胞外基质的合成和降解主要依 赖于该处基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)及其组织抑制剂 (tissse inhibitor ofMMP,TIMP)的动态平衡。基质金属蛋白酶是一个含锌的酶 家族，能降解多种心血管基质，从而在心血管疾病的发生和进展中起着一定作 用。另外，多个冠心病候选基因研究发现多种基质金属蛋白酶基因启动子多态 性与疾病相关，不同基因型的个体其发生冠心病及其他心血管疾病的可能性不 同。这从基因水平阐明了基质金属蛋白酶对于心血管疾病发生和发展的重要意 义。因此，我们用体外培养的细胞实验以及冠心病患者的血浆和基因多态性分 析试验来探讨MMPs在动脉粥样硬化及其相关疾病中的意义。 方法：1．在体外培养了人内皮细胞和大鼠主动脉中膜平滑肌细胞和夕}膜成 纤维细胞，利用高浓度葡萄糖、凝血酶及氧化低密度脂蛋白对培养的细胞千预 24-48 h，同时用辛伐他汀与这些病理刺激同时孵育，观察辛伐他汀对这些刺激 产生病理生理变化的影响。通过提取细胞总RNA、总蛋白及条件培养基，用 RT-PCR、western blotting及酶谱法(zymography)来分别检测MMP一2、MMP．3 及TIMP-1 mRNA和蛋白质在细胞中的表达变化以及辛伐他汀所产生的作用。 2．用MTT比色法观察这些病理刺激对血管中膜和外膜细胞增殖的影响，斟及辛 伐他汀对这些刺激的影响。3．收集了正常对照组(n=17)及单纯冠心病组(tit=18)、 上海第二医科大学博士学位论文心肌梗死组(n=16)和冠心病合并糖尿病组(n=16)患者的外周血浆，用夹心 上海第二医科大学博士学位论文 心肌梗死组(n=16)和冠心病合并糖尿病组(n=16)患者的外周血浆，用夹心 ELISA法检测其中MMP．3的水平，以了解MMP．3在这些疾病发生与进展中的 意义。4，收集正常对照组(n=38)和冠心病组(n=45)患者的外周血，提取基 因组DNA，通过特异性引物PCR反应分析MMP-2基因启动子．1306 C／T多态 性与冠心病发病的相关性。 结果：1．与对照组和100 mfalL葡萄糖及5 U／mL凝血酶相比，500 m鲋L 的高糖10 U／mL凝血酶均能刺激血管中膜平滑肌细胞和外膜成纤维细胞增殖， 同时其促细胞增殖作用能被辛伐他汀抑制，且辛伐他汀的抑制作用随着浓度的 增加而增加。2．与对照组相比，500 mgML葡萄糖、10 U／mL凝血酶和25批g／mL 的氧化低密度照蛋白均能不同程度地增加这些血管壁细胞中MMP．2、MMP一3 表达，并可能影响其中部分细胞TIMP—l的表达。而500 nmoULol／L辛伐他汀 能拮抗这些病理刺激对MMP表达的影响。3．与正常对照组相比，冠心病组患 者血浆中MMP一3水平无差异，而心肌梗死组患者血浆MMP．3较高，冠心病合 并糖尿病组患者血浆MMP．3水平略高于对照组，但无统计学差异。4．在目前的 样本中，未发现MMP．2基因启动予．1306 C／f多态性与冠心病相关。 结论：通过体外培养的细胞实验及临床基础试验的结果表明，高浓度葡萄 糖、凝血酶和氧化低密度腊蛋白等致动脉粥样硬化刺激因素能促进血管壁细胞 增殖及其中基质金属蛋白酶(MMP．2、MMP．3)的表达，表明基质金属蛋白酶 在动脉粥样硬化及其相关疾病的发病机制中起着一定的作用。同时辛伐他汀对 这些病理刺激的拮抗作用表明其在调脂作用之外还有其他心血管效应，有益于 治疗动脉粥样硬化及冠心病。 关键词：基质金属蛋白酶；动脉粥样硬化；血管内皮细胞；平滑肌细胞：外 膜成纤维细胞；糖尿病；氧化低密度脂蛋白；凝血酶；辛伐他汀；基因