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当前基因治疗的现状和一般性技术路线 摘 要：基因治疗是当前医学领域研究的热点和前沿问题，本文论述了基因治疗的现状和一般性技术路线，供相关领域的研究人员和一般科学工作者参考。 关键词：基因治疗 CGT CAR-T 中图分类号： Q819 文献标识码： A 文章编号： 1003-9082（2018）04-0-01 基因治疗目前作为一种非常规疗法，对于彻底治疗一些具有罕见破坏性遗传病，如交界性大疱性表皮松解症（ junctional EB，JEB），和一些罕见的进行性神经肌肉功能损坏性遗传病，如 Ι型脊髓性肌萎缩症 SMA Ι）， 和一些常见的延迟发病的神经功能退行性疾病，如帕金森病（ Parkinson’s disease，PD），还有特定的病毒感染性疾病（如艾滋病， AIDS ）和某些种类的恶性肿瘤 （如急性淋巴白血病， ALL ），都已经表现出了光明的前景。 细胞和基因治疗领域 （Cell and Gene Therapy，CGT）也是当今生物医学研究的重要 的前沿和热点课题。 一、当前基因治疗的现状 当前基因治疗技术还不是很成熟的治疗方式，总 体上还处在实验探索的阶段，还具有一定的风险性，其安全性和有效性还需要有很大的提高。往往是在没有很好的常规治疗方式前提下，对于一些危害性较大的疾病的一种试验性治疗。对于不同的疾病，其治疗效果往往相差很大；不同的机构对于同一种疾病，其治疗的过程也有较大差异。另外，基因治疗前期要投入大量人力、物力和时间，所面对的又是小范围内的患者，所以导致了其高昂的治疗费用。 二、当前基因治疗的一般性技术路线当前基因治疗的主要有三种情况：第一种，外源基因基因直接导入法 虽然说是基因直接导入，却不是直接将基因片段导入靶器官，因为直接导入，基因无法整合到靶细胞基因组里面，也就得不到表达。常用的方法就是将腺 相关病毒（ Adeno-Associated Virus，AAV）作为载体，然后导入靶器官。为了实现更高的目的蛋白质表达量和降低免疫毒性，往往还需要对载体进行改造，对目 的基因进行密码子优化。根据《自然 ?通讯》报道，英 法合作团队以狗为动物试验模型地开发出了较为成功 的针对杜氏肌营养不良症 （DMD ）的基因疗法。 DMD 患者均为男性，患者在几岁时就会表现出肌无力症状， 后来会恶化到无法自己行走，随后各种肌无力问题相 继出现。一种抗肌萎缩蛋白有关的基因变异影响了抗肌萎缩蛋白的生成，进而影响肌肉的功能，导致了 DMD 。研究小组将抗肌萎缩蛋白基因进行了 “压缩”，制作出功能性缩微版抗肌萎缩蛋白， 并成功利用 AAV 载入 12 只 DMD 狗的体内。他们仅对这些狗进行注射治疗了一次，两年来这些狗的病情被成功抑制，不但临床症状稳定，肌肉功能还得到了很大程度的改善。 第二种， CAR-T 疗法 经过 CAR（细胞嵌合抗原受体， Chimeric Antigen Receptors ）改造后的、能够靶向表达特定抗原的癌细胞的―― T 细胞，然后回输到患者体内， 消灭癌细胞。先是采集患者体内的 T 细胞，对其进行基因修饰，将目的基因通过载体转入 T 细胞，成功表达后，进行培养，大量增殖后回输，这些改造后的细胞在体内能够稳定增殖，而消灭癌细胞。 如美国弗雷德 ?哈钦森癌症研究中心（ Fred Hutchinson Cancer Research Center） Stanley Riddell 等用 CAR-T 疗法去治疗 29 位晚期急性淋巴细胞白血病患者， 有 27 位患者病情有某种程度的缓解，有效率高达 93%，其中超 ?^一半的患者甚至完全缓解。 第三种，基因干细胞移植疗法 芝加哥大学的 Xiaoyang Wu 教授将干细胞技术、 CRISPR 基因编辑技术、与皮肤移植技术相结合，开发出一种基因疗法有望对肥胖症与 2 型糖尿病这两种常见疾病进行治疗。 他们使用 CRISPR 基因编辑手段，给编码 GLP1 （胰高血糖素样肽 1） 的基因引入了一个能显著提高其半衰期的突变，再把这条基因接在了一个抗体基因片段上，并在前头安上了一个受多西环素 doxycycline）诱导的启动子。然后将此引入到小鼠的皮肤细胞，在生长环境的诱导下，生成了具有多层结构的“皮肤类器官”，再移植到小鼠皮肤上。 令人欣慰的是，大部分小鼠没有出现显著的排斥反应。这些皮肤里内嵌有基因疗法系统的小鼠，在诱导剂的作用下，体内的 GLP1 水平显著上升，这也让血液里的胰岛素水平上升，有效控制了血糖。 Michele De Luca 等人用基因干细胞疗法成功治愈了一个 7 岁的患有严重的遗传性疾病――交界性大疱性表皮松解症 （junctional EB ）的小男孩。从该患者腹股沟区获取了一小块正常表皮，用逆转录病毒载体将正常的 LAMB3 基因整