急性中耳炎中,髓过氧化物酶促进肺炎链球菌清除和致组织损伤的作用机制研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

重庆 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文名称 中文名称 S.pn Streptococcus pneumoniae 肺炎链球菌 AOM Acute otitis media 急性中耳炎 PMN Polymorphonuclear 中性粒细胞 ROS MPO NE Reactive oxidative species Myeloperoxidase Neutrophil elastase 活性氧 髓过氧化物酶 中性粒细胞弹性蛋白酶 NETs Neutrophil extracellular traps 中性粒细胞胞外捕获网 ELISA Enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 TP Total Protein 总蛋白 LDH Lactate dehydrogenase 乳酸脱氢酶 FBS Fetal calf serum 胎牛血清 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 PBS Phosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液 PBS-T Phosphate buffered solution-Tween20 Tween20 磷酸盐缓冲液 DAB 3,3’-diaminobenzidine 二氨基联苯胺 DCFH-DA 2 ＇， 7 ＇ -dichlorodihydro fluorescein diacetate 2＇，7＇ -二氯荧光素二乙 酸酯 DCF 7＇ -dichlorodihydro fluorescein 7＇ -二氯荧光素 DPI Diphenyleneiodonium chloride 二联苯碘 4-ABAH 4-Aminobenzoic acid hydrazide 4-氨基苯甲酸酰肼 MELF Middle ear lavage fluids 中耳灌洗液 1 急性中耳炎中，髓过氧化物酶促进肺炎链球菌清除和致 组织损伤的作用机制研究 摘 要 急性中耳炎（AOM）是儿童最常见的感染性疾病之一，中性粒细 胞是最先募集到感染部位的效应细胞，其对控制 S.pn 的感染至关重要。 临床研究显示中耳炎病人的中耳分泌液及中耳上皮粘膜层中均检测到 表达丰富的髓过氧化物酶（MPO），但其在中耳炎中的作用机制尚未见 报道。因此，本研究通过构建 C57BL/6 小鼠肺炎链球菌急性中耳炎模 型，体内使用特异性抑制剂方式，以研究 MPO 在中耳炎中的作用。在 肺炎链球菌 6B 感染的小鼠急性中耳炎中，我们发现 MPO 高表达，此 外，还检测到胞内活性氧（ROS）及中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）水 平的升高。本研究发现 MPO 在肺炎链球菌中耳炎的杀菌过程中起重要 作用，而 ROS 仅在早期参与对细菌的清除作用。体内抑制 MPO 活性 后，ROS 的产生下降，但不影响 NE 的表达。进一步研究它们在中耳 炎组织损伤中发挥的作用，发现三种成分均有致组织损伤的作用。最 后，本研究显示 MPO 可能通过直接作用于中耳上皮细胞的方式及诱导 中性粒细胞凋亡及坏死的方式促进了其对中耳上皮的损伤。综上所述， 本研究提示中性粒细胞 MPO 在肺炎链球菌 AOM 中发挥对细菌的清除 及致组织损伤的关键作用，此外，ROS 及 NE 也在致组织损伤中发挥 2 重要作用。 关键词：急性中耳炎，髓过氧化物酶，胞内活性氧，弹性蛋白酶 3 MYELOPEROXIDASE PROMOTES PNEUMOCOCCAL CLEARANCE AND INDUCES TISSUE DAMAGE IN ACUTE OTITIS MEDIA ABSTRACT Acute otitis media (AOM) is one of the most common infectious diseases in children, neutrophils are the first effective cells to arrive at a site of infection, and crucial to control the infection of Streptococcus pneumoniae （S.pn）. Clinical studies have shown that a high expression level of Myeloperoxidase（MPO） in middle ear fluid and epithelia mucosa layer in patients with otitis media, but its role in otitis media has not been reported. In