非水介质中酶的化学催化反应.pptVIP

10 非水介质中酶的催化反应 10 Enzymatic Reactions in Non-aqueous System 主要内容 非水介质中酶的催化反应及特征(比较重要) 非水介质中酶的结构与性质(比较重要) 微水有机溶剂的影响与反应介质工程(重要) “pH值记忆”与“分子印迹”技术(重要) 反向胶团的酶学研究(了解) 水-有机溶剂两相体系(了解) 酶在非水介质中的催化反应(了解) 应用实例(了解) 10.1 非水介质中酶的催化反应 非水酶催化技术起源于20世纪80年代(1984年的Science文章为标志)，起初主要是为了解决非极性底物的转化问题，出现后备受追捧，并获得了广泛的应用。原因： 在非水介质中酶催化反应具有新的特点和优势； 在非水介质中酶的稳定性增加。 10.1 非水介质中酶的催化反应 哪些特点和优势？ 适用于脂溶性的底物，拓宽了底物范围。 反应的平衡点发生了变化。在水溶液中不能发生的反应可以在非水介质中发生，如脂肪酶可催化合成反应。 专一性增加，特别是手性专一性提高。 稳定性提高。 易回收使用 避免微生物污染。 减少或防止由水引起的副反应。 可催化对水敏感的底物反应。 10.1 非水介质中酶的催化反应 热稳定性提高，原因？ 酶的变性失活需水的参与，如 形成错误的空间结构，需氢键变换，而水参与形成氢键； S-S键破坏，需水的参与； 天冬酰胺、谷氨酰胺的脱酰胺反应； 天冬酰胺、谷氨酰胺构成的肽键发生水解等。 非水介质中无水或水含量很少。 10.1 非水介质中酶的催化反应 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2.1 非水介质中酶的结构 酶不能直接溶于有机溶剂，非水介质中的酶可能以两种形式存在： 不溶的固态酶(较多见) 溶解的酶(通过修饰后使酶能溶解于有机溶剂中) 不溶的固态酶，其周围仍结合有微量水份。 水分少，氢键以酶分子内形成为主导，酶分子的刚性强，稳定性好。 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2.2 非水介质中的酶学性质 10.2.2.1 酶的稳定性提高 非水介质中酶的稳定性提高。水分少，酶蛋白的结构刚性增强，引起酶变性失活的因素减少。 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2.2.2 酶的特异性发生变化 底物的特异性 对映体的选择性 位置选择性 化学键选择性 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.2 非水介质中酶的结构与性质 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3.1 水的作用及其调控 10.3.1.1 水是酶构象的润滑剂 无水则酶为绝对刚性，绝对刚性的酶是没有活性的。有少量水则柔性增加，活性恢复，水分增加到一定程度后继续增加对活性的提高没有促进。 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3.1.2 水分测定与水活度 酶的催化活力与其结合水的多少直接相关，而其结合水与水活度直接相关。 水在反应体系中会发生分配。这种分配导致直接以溶剂中的水含量计算酶的结合水会出现误差，以水活度计算才比较准确。 水活度的定义：在一定温度和压力下，反应体系中水的蒸汽分压与相同条件下纯水的蒸汽压之比。 水含量的测定：卡尔-费休法。 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3.1.3 水活度的调控 饱和溶液平衡法。将酶与盐的饱和溶液平衡，同时将含有底物的溶剂平衡至相同的水活度。 高水合盐调节法。向干燥的反应体系中直接加入一种高水和盐。如NaHPO4·12H2O变为NaHPO4·2H2O时向反应体系释放水。 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3.2 有机溶剂的影响与反应介质工程 10.3.2.1 有机溶剂的作用与lgP 在不同的有机溶剂中酶的催化活性有差异。差异的来源：有机溶剂作用于结合在酶表面的水层，产生溶剂“扭曲（或扰动）”效应。溶剂产生溶剂扭曲效应的能力与其疏水性(极性)有关，疏水性(极性)指标可用lgP表征。极性越强，“扭曲”越强。 P(分配系数)的概念：化合物(如非水介质)在标准正辛醇-水两相体系中的分配系数。 10.3 微水有机溶剂的影响与反应介质工程 10.4 “pH值记忆”与“分子印迹”技术 Zakes和Klibanov将猪胰脂肪酶溶解于具有不同pH值的缓冲液中，然后在冷丙酮中进行沉淀，真空干燥，从而使酶带有不同初始微环境pH，然后用于催化三丁酸甘油脂的水解。 结果发现酶的水解活力与溶解酶