基因工程的规范流程操作程序.pptVIP

原核细胞的基因结构 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 基因的种类 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 启动子与终止子 基因组文库和部分基因文库 利用PCR技术扩增目的基因 DNA的基本单位－－核苷酸 位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质，但启动子本身不被转录 2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白“的三位科学家。将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用是 A．追踪目的基因在细胞内的复制过程 B．追踪目的基因插入到染色体上的位置 C. 追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布 D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构。 基因工程载体的构建需要考虑哪些因素 （1）基因的特点：如果一个来自动物的目的基因含有内含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的内含子剪切掉，只能用该基因的cDNA。基因的产物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌中表达出来的蛋白就可能不具备天然状态下的活性，因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加上的，而细菌无这些细胞器。 （2）要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使基因产物量增多。如果希望基因在生物的某个组织表达，如只在植物种子中表达，就要选择种子中特异表达的启动子。 （3）要有选择标记基因，如抗生素基因，以便选择出真正的转基因生物。 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 动物细胞 显微注射法 微生物细胞 Ca2+处理 四、目的基因的检测与鉴定 检测: 是否插入目的基因 是否转录 是否翻译 鉴定: 功能活性鉴定 抗性鉴定 继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答： （1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是____________________。 （2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入__________中，原因______________________ （3）通常采用____________________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。 （4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的__________细胞中特异表达。 分别提取什么进行检测 归纳步骤 ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入 了目的基因 过程: A. 首先取出转基因生物的基因组DNA B. 对含目的基因的DNA片段作放射性同位素 标记，以此做探针 C. 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带，表明染色体已插入染色体DNA中 方法: DNA分子杂交 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原---抗体杂交 过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交，若出现杂 交带，表明目的基因转录出了mRNA. 鉴定—— 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 显微注射 受精卵 受精卵（或早期胚胎细胞）具有全能性，可使外源基因在相应的组织细胞中表达。 DNA分子杂交 膀胱上皮 （或早期胚胎） 脱氧核苷酸 核糖核苷酸 dNMP dAMP dGMP dCMP dTMP NMP AMP GMP CMP UMP PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增 　1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，理论上至少需要几个引物？ 细胞内复制 .VS. PCR扩增 DNA母链 4种　dNTP Taq DNA聚合酶 引物（2个snDNA） 温度控制 1）模板： 2）原料： 3）酶： DNA母链