肌肌醇加氧酶在糖尿病肾病中的表达变化及其与肾小管间质纤维化的关系-内科学(内分泌)专业论文.docx

南京医科大学博士学位论文肌肌醇加氧酶在糖尿病肾病中的表达变化及其与肾小管间质 南京医科大学博士学位论文 肌肌醇加氧酶在糖尿病肾病中的表达变化及其与肾小管间质 纤维化的关系 【摘要】 目的探讨肌肌醇加氧酶(MIOX)在糖尿病肾脏病变过程 中表达的变化及其在。肾小管间质纤维化形成中的作用。方法(1)在体 内，应用链脲佐菌素(STZ)诱导SD大鼠建立糖尿病(DM)大鼠模型， 随机分为眺和糖尿病肾病(DN)组，并设正常组作为对照，分别观 察4周(DM组)和12周(DN组)，测定血尿素氮，肌酐、血糖和24 h 尿微量白蛋白、尿肌酐。取大鼠的肾皮质，病理切片染色观察肾小管间 质的变化。提取肾皮质组织总鼢姨和蛋白，Real-time RT．PcR比较正常 SD大鼠、DM大鼠和DN大鼠肾皮质MIOX mRNAg达的变化；分别用 RT-PCR和Western blot检测。【．SMA、E．cadherin、fibroneetin mRNA和 0t-SMA、E．cadhe血蛋白表达的改变。(2)在体外培养大鼠肾小管上皮 细胞NRK．52E，分别在不同时间和用不同浓度的高糖刺激NRK．52E细 胞，并设正常细胞组和甘露醇组作为对照，提取细胞总RNA和蛋白， R1二Pc酗佥测MIOX、a．SMA、E．cadherin、fibronectin mRN』婊达的变化； Western blot植g-测a．SMA、E．cadlle咖蛋白表达的改变。(3)构建MIox基 因重组质粒pcDNA3．1．MIOX，稳定转染NRK-52E细胞，RT-PCR和 Western blot分别比较转染重组质粒pcDNA3．1．MIOX、空载质粒 pcDNA3．1的NRK-52E细胞与正常NRK-52E细胞中a．SMA、E．cadherin、 fibronectin mRNA和a．SMA、E．cadherin蛋白表达的变化；设计针列-MIOX 基因的反义寡脱氧核苷酸(anti—sense oligodeoxynucleotide，ASODN)和 正义ODN(SODN)，分别转染正常NRK．52E细胞，8 h后再用高糖刺激， 并与高糖刺激的正常NRK．52E细胞相比，R正PcR和w毫stem blot检测转 南京医科大学博士学位论文染ASODN，转染SODN的NRK-52E细胞a-SMA、E．cadhefin、fibronectin 南京医科大学博士学位论文 染ASODN，转染SODN的NRK-52E细胞a-SMA、E．cadhefin、fibronectin mRNA和a．SMA、E-cadherin：蛋-表达的改变。结果(1)与正常对照相 比，DM大鼠尿微量白蛋白、血肌酐开始升高，而DN大鼠升高更明显； 肾脏病理切片Masson染色显示，DN大鼠已出现肾小管闻质纤维化的改 变：Real．time RT-PcR发现，与正常对照相比，DM大鼠肾皮质中MIOX mRNAg达增高，DN大鼠升高更明显；与正常对照相比，DM大鼠、DN 大鼠肾皮质中a-SMA mRNA和蛋白、fibronectin mRNA的表达增加、 E．cadherin mRNA和蛋白的表达减少，差异均具有显著性(P值均o．01)． (2)与正常NRK．52Efi目胞组和甘露醇对照组相比，高糖呈时间和浓度 依赖性刺激NIⅨ．52E细胞的MIOX mRNA、a．SMA mRNA和蛋白、 fibronectin mRNA的表达增加； E．cadherin mRNA和蛋白的表达减少。 差异均具有显著性(P值均o．05)。(3)与转染空载质粒和正常细胞相比， 转染重组质采,-#-pcDNA3．1．M【Ox的砌【．52E细胞a．SMA mRNA和蛋白， fibronectin mRNA的表达增加； E—cadhefin mRNA和蛋白的表达减少． 差异均具有显著性(P值均0．05)。转染ASODNflg明显抑制正常NRK-52E 细胞高糖刺激后MIOX蛋白的表达；与转染SODN细胞和高糖刺激的正 常细胞相比，转染ASODN的NRK．52E细胞高糖刺激后a．SMA mRNA和 蛋白、fibronectin mRNA的表达增幅减少；E．cadherin mRNA和蛋白的表 达减少程度下降，差异均具有显著性(P值均o．05)。结论在糖尿病 肾脏病变过程中存在vaoxg达的增高，这可能与DN肾小管问质纤维化 的形成有关。 关键词糖尿病肾病；肾小管间质纤维4Jc；肌肌醇加氧酶；大鼠；肾小 管上皮细胞；表迭 南京医科大学博士学位论文The 南京医科大学博士学位论文 The gene expression of myo-inositol oxygenase and its potential