黄体酮对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障通透性影响及其机制的研究-神经病学专业论文.docxVIP

响及其机制的研究硕士生：赵春艳 响及其机制的研究 硕士生：赵春艳 导师：王建平教授 郑州大学第五附属医院神经内科 河南郑州450052 摘要 背景与目的 随着人口老龄化的加剧，脑血管疾病的发病率同趋升高，已成为人类三大 主要死因之一，其较高的发病率、致残率及致死率，给社会及家庭带来严重的 经济和精神负担。脑血管疾病主要分为缺血性和出血性两种，其中缺血性脑血 管疾病约占80％。目前公认的缺血性脑卒中急性期有效的治疗方法是时间窗内 的溶栓治疗，这给脑梗死患者带来希望的同时，也带来了再灌注损伤问题。脑 缺血再灌注损伤病理生理过程复杂，血脑屏障的破坏是其中的一个重要因素。 血脑屏障(blood．brain barrier，BBB)是中枢神经系统内环境稳定的有力保证， 在血管源性脑水肿的形成中占有重要地位。血脑屏障的基本结构包括：脑微血 管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells，BMECs)及其间的紧密连接(tight iunction，TJ)，基底膜和星形胶质细胞终足形成的胶质膜及细胞外基质。其中， 血管内皮细胞问的紧密连接(tight junction，TJ)是BBB通透性调节的中心环节， TJ相关蛋白表达水平的变化与BBB通透性的改变及脑水肿的程度密切相关。闭 锁小带蛋白．1(zonula occludens．1，ZO．1)与咬合蛋白(Occludin)是TJ相关蛋 白中最具有代表性的两个蛋白，为构成脑微血管内皮细胞问紧密连接复合体的 重要结构蛋白。研究表明，ZO．1、Occludin等蛋白表达量的改变、位置分布的变 化及结构功能异常均可破坏TJ的完整性，从而导致BBB通透性增加。 国内外对黄体酮(progesterone，PROG)在中枢神经系统中的作用做了大量 的研究，表明黄体酮对脑外伤、脑梗死及缺血再灌注损伤大鼠具有明显的神经 摘要保护作用。很多研究显示：减轻血脑屏障的通透性是黄体酮发挥神经保护作用 摘要 保护作用。很多研究显示：减轻血脑屏障的通透性是黄体酮发挥神经保护作用 的途径之一。但其具体机制尚不清楚。 本实验采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型，通过观察黄体酮 对紧密连接蛋flzo．1、Occludin表达及血脑屏障通透性的影响，探讨黄体酮减轻 血脑屏障通透性可能的分子生物学机制。 材料与方法 1．动物模型与分组 本实验采用鼠龄3～4个月、体质量250--3009的健康雄性SD大鼠。采用 线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion and reperfusion，MCAO／R)模型。首先将72只大鼠随机分为：假手术组、缺血2h再 灌注3h、再灌注12h、再灌注24h、再灌注48h及再灌注72h组，每组12只大 鼠。取BBB通透性最大组时间点，增设黄体酮干预组和溶剂对照组，每组12 只大鼠。将黄体酮溶于22．5％2．羟丙基．13．环糊精(HBC)，黄体酮组于术前1h、再 灌注后1h、6h分别给予腹腔注射黄体酮溶液一次(8mg／kg)；溶剂对照组给予等 体积的HBC。 2．BBB通透性检测 以伊文氏蓝(Evans blue，EB)作为示踪剂检测BBB损伤程度，采用分光 光度法测定渗出血管外的EB含量来评价BBB的通透性。 3．HE染色和免疫组织化学法检测 HE染色判断脑组织损伤的程度和缺血的范围；采用免疫组化(SP法)检测 ZO．1和Occludin蛋白在缺血侧脑组织中的表达和分布情况。 4．Western blot法检测ZO．1和Occludin的表达水平 取各组大鼠缺血侧半球额顶区皮质约100mg，测定总蛋白含量，使用western blot方法分别测定ZO．1和Occludin蛋白的表达水平。 5．统计学分析 采用SPSSl3．0统计软件进行处理。各项检测结果均以J士s表示。两组间比较 采用两样本t检验：多组|’日J比较用完全随机设计的单因素方差分析(one way ANOVA)，当方差分析有显著性差异时，进一步用LSD检验作两两比较；相关性 分析采用Pearson积矩相关；当P0．05时差异具有统计学意义。 结果 1．HE染色结果 经元形念改变不明显。再灌注12h神经元出现较为明显的缺血性改变，核固缩或 经元形念改变不明显。再灌注12h神经元出现较为明显的缺血性改变，核固缩或 偏位，染色加深，胞浆空泡形成，组织间质疏松，且缺血性改变逐渐加重。再 灌注24h时脑组织神经元结构消失，细胞间隙水肿严重，炎症细胞浸润。溶剂组 与再灌注24h组表现相似；黄体酮组亦出现组织结构紊乱，核固缩，胞浆内容物 减少等，但较再灌注24h组及溶剂组损伤程度明显减轻。 2．EB含量检测结果 缺血2h再灌注3h脑组织EB含量较