脊髓背角突触传递可塑性在病理性疼痛中的作用-生理学专业论文.docxVIP

中山人学博』j学位论文 中山人学博』j学位论文 脊髓背角突触传递町塑件在病理性疼痛中的作用 脊髓背角突触传递可塑性在病理性疼痛中的作用 博士研究生：胡能伟 专 业：生理学 导 师：刘先国教授 摘 要 神经损伤引起病理性疼痛(pathological pain)，表现为痛阈下降(allodynia， 非伤害性刺激引起疼痛，亦称痛超敏)、痛反应增强(hyperalgesia，对伤害性刺 激的反应增强，亦称痛觉过敏)和自发性疼痛(spontaneous pain)。病理性疼痛 的显著特征是在病灶去除或损伤愈合后疼痛依然持续很长时间，严重影响病人的 生活。但迄今为l上=，病理性疼痛的机制仍刁i清楚，临床上尚没有有效的治疗方法。 近年来，大量的研究表明，神经损伤引起的脊髓背角神经元突触传递的可塑性变 化，即中枢敏感化在病理性疼痛的产生与维持中超重要作用。 1995年，刘先国等首次报导了脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强 (10ng·termpotntimion，LTP)现象。众所周知，c纤维的主要功能是传导痛觉， 并与脊髓背角神经元形成突触联系；而LTP是指突触传递效率长时间的增强， 被认为是学习与记忆的突触机制。因此，脊髓背角C纤维诱发电位的LTP(即初 级传入c纤维与脊髓背角神经元之间突触传递效率的持续性增强)意味着痛觉 可在脊髓背角形成记忆。但痛记忆的机制尚不清楚。 幻肢痛(phantom limb pain，PLP)是病理性疼痛的一种特殊类型，其机制尚不 清楚。大鼠坐骨神经切断(sciatic nervetransection，SNT)模型可以很好地模拟临 床幻肢痛的症状。有研究报导，神经损伤后，损伤及部分未损伤的A B纤维中枢 端出芽，投射到II板层。这一形态学变化被认为是产生痛超敏的基础。然而， 最近的一些研究证明，神经损伤后只有极少量甚至没有A 0纤维向脊髓背角II 板层出芽。尽管形态学的结果并不一致，但电生理结果却显示，神经损伤后大部 中山大学博卜学位论史 中山大学博卜学位论史 脊髓背角突触传递町塑性在病理性疼痛中的作用 分If板层神经元对刺激A 13传入纤维敏感，表明A B传入纤维和II板层神经元 的确建立了新的功能性突触联系。然而，神经损伤如何导致了新的功麓性突触联 系还知之甚少。 本研究采用细胞外记录、全细胞膜片钳、小分子干扰RNA、和免疫组织化 学技术探讨了大鼠脊髓背角c纤维诱发电位LTP维持的机制和坐骨神经损伤后 A B传入纤维兴奋脊髓背角神经元的机制。 1．脊髓背角c纤维诱发电位LTP的晚期维持需要新的蛋白质合成 海马LTP分为早期(1—3 h)和晚期(3 h以后)两个时相。晚时褶的维持 需要新的蛋白质的合成。脊髓背角c纤维诱发电位LTP的维持是否需要蛋白质 合成尚不清楚。在本研究中我们观察到，强直刺激坐骨神经之前30 min，脊髓记 录节段局部加入蛋白合成抑制剂(cycloheximide和anisomycin)，可选择性抑制 脊髓背角LTP的晚期时相。这两种药物对LTP的诱导和基础电位均无影响。在 片j cycloheximide预处理的动物，强直刺激后1 h，C纤维诱发电位增大为 281．5士16．5％(n=6)，强直刺激后145 min，C纤维诱发电位显著下降至235．5士18．5％ (pO．05)，此后电位继续下降，至270 min，C一纤维诱发电位恢复为对照水甲 (104．8土4．8％VS 130．8土18．0％，pO．05)。强直刺激前30 min，脊髓局部加入 anisomycin，得到了相似的结果fn=61。 2．抑制CdIKII的合成选择性地抑制脊髓背角C纤维诱发电位LTP的晚 期时相 本课题组以往的研究表明，诱导脊髓LTP后3 hCaMKII的蛋白总量明显增 加，但其意义尚不清楚。海马LTP的研究显示，用转基因方法去除树突内CaMKII 的mRNA，从而干扰CaMKII的合成町显著抑制晚期LTP和空间记忆。本研究 采用小分子干扰RNA技术，并结合电生理、免疫组织化学方法，观察CaMKll siRNA对脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和维持的作用。我们发现，强直 刺激前3 h脊髓局部加入CaMKII siRNA可选择性地抑制晚期LTP和CaMKII蛋 白量的增高，但不影响脊髓LTP的诱导和早期维持。在脊髓局部给予CaMKII II 中山入学博{：学位论文 中山入学博{：学位论文 脊髓背角突触传递可塑性在病理陆疼痛中的作朋 siRNA的动物，强直刺激后1 h，C纤维诱发电位增大为206．8 4-13．50％(n=9)， 强直刺激后185min，C纤维诱发电位显著下降