氧化应激所致的人皮肤成纤维细胞衰老中p一连环蛋白的表达研究.PDF

2011年4月第 44卷第 4期 ChinJDermatol，Aoril2011Vo1．44 N0．4 259 · 论 著 · 氧化应激所致的人皮肤成纤维细胞衰老中 p一连环蛋白的表达研究 田黎明 谢红付 李吉 杨婷 王玮蓁 胡耀华 摘【要】 目的 观察B一连环蛋白在氧化应激所致的人皮肤成纤维细胞衰老中的变化，探讨其在应 激诱导的皮肤衰老中可能的作用。方法 从儿童包皮分离培养原代成纤维细胞，H：0处理第2～4代人 皮肤成纤维细胞，显微镜观察其形态学改变，p一半乳糖苷酶细胞衰老试剂盒检测B一半乳糖苷酶活性， RT—PCR、Western印迹检测 31连环蛋白mRNA和蛋白表达水平。结果 150txmol／LH：O：处理2h后可以 诱导人皮肤成纤维细胞衰老。在应激诱导的衰老 (SIPS)细胞中B一半乳糖苷酶阳性率达到 (37．67± 1．53)％，而对照细胞中只有(2．97±0．25)％，两组差异有统计学意义(P0。01)。RT—PCR结果显示，在对 照细胞组 B连环蛋 白／GAPDHmRNA比值为O．59±0．04，SIPS细胞组为0．29±0．30，对照细胞组明显高 于SIPS细胞组，两组差异有统计学意义(t=10．06，P0．叭)。Western印迹结果显示，对照细胞组 B连环 蛋白／GAPDH蛋白比值为0．62±0．03，SIPS细胞组为0．31±0．01，对照细胞组明显高于 SIPS细胞组，两组 差异有统计学意义(t=14．97，P0．01)。结论 150~mol／LH0：处理 2h可以诱导人皮肤成纤维细胞发 生衰老改变，SIPS细胞中p连环蛋 白表达水平明显降低，初步推测 B连环蛋白可能是调控皮肤衰老的重 要靶基因。 【关键词】成纤维细胞；31连环素；细胞衰老；B半乳糖苷酶类 ExpressionofB．eateninin oxidativestress．inducedprematuresenescenceofhumanskin fibroblasts TIANLi—ming*,xIEHong-fu，LIJi，YANGTing,WANGW ei—zhen，HU Yao-hua．*DepartmentofDermatology, XiangyaHospital,Cen~M SouthUniversitv,Changsha410008．ChhJa CorrespondingatlthoKLIJi，Emaihlvdia．1208@hotmail．com A【bstract】0bjective Toobservethechangesof31一cateninexpressioninhumanskinfibroblasts(HSFs) afterinducedbyoxidativestress．andtoexploreitspossiblerolesifloxidativestress．inducedprematuresenes— cence (SIPS)ofHSFs．Methods Fibroblastswereisolatedfrom theforeskinofachildandsubjectedtoa pnmau cuhure．ThefibroblastsofsecondtofourthpassageweretreatedwithvariousconcentrationsofH202for 2hourstoestablishanoptimizedmodelofstress—inducedprematuresenescence．31一galactosidaseassaykitwas usedtodetecttheactivityof31一galaetosidaseinH，O，．inducedHSFs，RT—PCRandWesternblottomeasurethe mRNA andproteinexpressionsofG．cateninincontrolandsenescentHSFs．Results Prematuresenescenceof HSFscouldbeinducedbythetreatmentwithH2O2of150~moYLfor2hours．Theproportionof8一galactosi— dase．positivecellswas