鸡油菌及其伴生真菌研究-微生物专业论文.docxVIP

贵州大学硕士学位论文 贵州大学硕士学位论文 中文摘要 摘 要 鸡油菌(CanthareiTes cibarius Fr．)俗名黄丝菌、杏菌，是一种著名的外 生菌根真菌，它的食用和药用价值已经得到人们的广泛认可，经常食用鸡油菌可 以防治眼病、抗癌和美容等。目前，人们对其在维持生态平衡、环境监测和促进 林木生长等方面的作用十分重视。 外生菌根真菌能产生植物生长素及其代谢物，加快根系的生长发育，扩大根 表面积，增加植物对水分及养分的吸收利用，加快植株生长；同时植物为其提供 碳水化合物等营养物质。由于特殊的生态条件、营养方式，目前鸡油菌尚不能进 行人工栽培，此外鸡油菌子实体相对较小，本身有很多伴生微生物，因而获得其 纯培养物难度较大。为此，本文对从鸡油菌子实体中分离到的一株伴生真菌进行 研究，内容包括菌丝体固体培养、液体培养、DNA分子鉴定、鸡油菌子实体和其伴 生真菌营养成分的对比分析等，主要研究结果如下： l、鸡油菌有很多伴生微生物，本研究从鸡油菌子实体中共分离出4株伴生真 菌(LBJ016、LBJ022、LBJ023、LBJ026)和多株细菌。DNA分子鉴定结果证明， 由上海购得的菌种(LBJ027)ITS序列提交NCBI进行网上比对，所得结果与XyIaria sp．相似性最高，结合其在普通PDA培养基中生长迅速的特点，认为其菌种分离有 误。鸡油菌伴生真菌LBJ016 ITS序列提交NCBI进行网上比对．所得结果与 Ascomycete sp．或Nectria gliocladio 相似性最高。 2、鸡油菌子实体和其伴生真,菌ide含s有多种功能成分。通过荧光分光光度法测定 鸡油菌子实体与伴生真菌中维生素A含量，发现鸡油菌子实体中维生素A含量为 L4．60 mg／lOOg，伴生真菌LBJ016的维生素A含量为13。54 mg／tOOg，而其余三株 含量很低；鸡油菌子实体和伴生真菌LBJOl6都含有多种人体必需的矿质元素，尤 其是人体极易缺乏的微量元素zn和Fe含量极高，其中鸡油菌的含铁量比LBJ016 的要高的多，分别为：鸡油菌子实体1700 ug／g，伴生真菌LBJOt6 294 ug／g。而 LBJ016含锌量相当于鸡油菌的两倍，鸡油菌子实体76．4ug／g，伴生真菌LBJOl6 143ug／g：鸡油菌子实体与LBJOl6都都含有人体必需氨基酸(不含亮氨酸)，含量 最高的均为赖氨酸。LBJ016中每一种氨基酸都是鸡油菌含量的两倍，此外鸡油菌与 LBJ016都不含有色氨酸。 3、培养基筛选结果表明，复合PDA培养基最适合伴生真菌LBJ016生长，其次 是改良的葡萄糖蛋白胨培养基，查氏培养基最不适应LBJ016生长。另外，松针对 LBJOl6的生长有促进作用。但在复合PDA培养基中是个例外，原因尚不清楚。 伴生真菌LBJ016喜中性偏酸环境，适宜生长的PH值为j一7，最适PH值是5； 对氮源的利用范围广，以蛋白胨最佳，每天菌落直径的增加3．683 mm，尿素、硝 贵州大学硕士学位论文 贵州大学硕士学位论文 中文摘要 酸钾和硝酸钠都是很好的氮源，其菌落直径每天以3．200ram、3．575mm和3．125ram 增大，对氨根离子利用不好，如LBJ016以草酸氨和硝酸氨为氮源生长情况最差， 其直径的日增加量仅为l-925mm和1．842mm；对碳源的利用研究表明，蔗糖最好， 果糖、葡萄糖次之，对其它碳源利用效果较差，乳糖最差。 伴生真菌LBJ016液体纯培养的优化工艺：通过单因素条件选择及正交试验研 究了碳源、氮源、矿质盐及维生素对伴生真菌LBJ016菌丝体生长的影响，从而确 定了伴生真菌LBJ016液体纯培养的最佳条件，即：蔗糖2．5％、蛋白胨1．5％、硫酸 镁0．01％、维生素B。(微量)0．005％、土豆汁25％、酵母膏2．5％、pH5，在此条件下菌 丝产量最高为2．0979／100ml。 4、鸡油菌予实体和其伴生真菌LBJ016多糖提取采用热水浸提法，通过单因子 试验确定了从伴生真菌LBJ016中提取多糖工艺参数的适宜范围，通过正交试验研 究了各因素对鸡油箧子实体和其伴生真菌LBJ016多糖提取率影响的主次顺序，确 定了最佳提取参数，研究表明：影响鸡油菌子实体粗多糖提取率的各因素主次顺序 是木瓜蛋白酶、加水倍数、温度和时间。鸡油菌子实体粗多糖的最佳提取参数为： 温度为80。C、25倍水、时间为40rain和不加本瓜蛋白酶，此条件下多糖提取率可 达12．593％；而影响伴生真菌LBJ016粗多糖提取率的各因素主次顺序是时间、温 度、加水倍数和木瓜蛋白酶，LBJ016粗多糖的提取的最佳条件是：40min、800C、 25倍水和不加木瓜蛋白酶。 5、薄板层折色谱法分析了鸡油菌子实体和其伴生真菌单糖组分。鸡油菌多糖 水解