黄斑蓝子鱼PPARs和HNF4α基因的克隆及环境盐度对其mRNA-海洋生物学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 中文摘要 过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome proliferation activated receptors，PPARs)是由 配体激活的转录因子，属于核受体超家族。激活的 PPARs 对调节体内多种代谢过程、特别 是脂质代谢具有重要作用。PPAR 一般存在三种亚型，即 PPARα、PPARβ(δ)和 PPARγ，分 别由不同的基因编码。目前，已在多种鱼类中克隆了 PPARs 基因，并进行了组织表达特性 的研究，但是，关于其功能、特别是在鱼类高度不饱和脂肪酸(HUFA)代谢中的作用的研究 尚少见报道。 肝细胞核因子 4α(Hepatocyte nuclear factor 4α，HNF4α)是肝细胞核因子家族成员之一， 对肝细胞的分化调控起关键作用，同时参与肝脏中糖、脂代谢相关基因的表达调控。HNF4α 基因已在斑马鱼、罗非鱼和金头鲷等鱼类中被克隆，但有关其功能、特别是在鱼类 HUFA 代谢中的作用也少见报道。 一般认为，海水鱼合成 HUFA 的能力缺乏或很弱。然而，本课题组最近在一种植食性 海水鱼类——黄斑蓝子鱼(Siganus canaliculatus)中首次发现海水鱼类具有 HUFA 合成能力。 为了进一步研究蓝子鱼 HUFA 合成代谢的分子调控机制，本论文克隆了蓝子鱼的转录因子 PPARs 和 HNF4α 基因，并对其组织表达特异性、环境盐度对其组织中的 mRNA 表达水平 和脂肪酸组成的影响进行比较研究，以探讨其在 HUFA 生物合成调控中的可能作用。主要 研究结果如下： 1. 采用 RT-PCR 和 RACE-PCR 方法获得蓝子鱼 PPARs 和 HNF4α 的 cDNAs：PPARα 全长 2577bp，共编码 477 个氨基酸；PPARβ 全长 2584bp，共编码 516 个氨基酸；PPARγ 编码区 1560bp，共编码 519 个氨基酸；HNF4α 全长 1736bp，共编码 454 个氨基酸。PPARs 和 HNF4α 都具有氨基酸序列具有保守的 DNA 结合区和配基结合区。蓝子鱼 PPARα、 PPARβ、PPARγ 及 HNF4α 与其它已知物种对应氨基酸序列的同源性分别为 75-78%、 70-93%、62-87%及 81-93%。 2. 利用 Real-time PCR 方法对上述基因进行组织表达特异性研究，结果显示，PPARs 在多种组织中有表达：PPARα 在眼睛、脑和心脏组织中的表达水平较高，在脾和脂肪组织 中的表达水平较低；PPARβ 在鳃组织中表达水平最高，在肠和肝脏中表达水平最低；PPARγ 在肠、鳃和肝脏中表达水平较高，在肌肉和眼睛中表达水平较低。这说明，蓝子鱼 PPAR 三亚型在不同组织中的表达水平不同。HNF4α 基因主要在肠、肝和眼睛等脂肪酸代谢较活 I II II 跃的组织中表达，在心脏、脾和鳃中几乎不表达。 3. 采用 Real-time PCR 方法对 PPARs 和 HNF4α 在不同盐度下(10 和 32 ppt)养殖的蓝子 鱼组织中的 mRNA 表达水平进行比较研究，检测的组织包括脂类代谢活跃的肝脏、脂肪及 另外两种高表达的组织。结果显示，在低盐组中，肝脏和脑中的 PPARα，鳃、肌肉和肝脏 中的 PPARβ，肝脏和鳃中的 PPARγ，肝脏和眼睛中的 HNF4α，基因表达水平要高于高盐 组。肌肉和肝脏组织脂肪酸组成的比较结果显示，低盐组肌肉中的 DHA 含量和 n-3/n-6 PUFA 比值，以及肝脏中的 n-3 和 n-6 PUFA、ARA、DHA、EPA 和 DPA 含量、n-3/n-6 PUFA 比值等都显著低于高盐组。这些结果提示，PPARα、β 和 γ，HNF4α 在蓝子鱼肝脏脂类代 谢、特别是 HUFA 代谢中可能具有重要的生物学功能。 综上所述，本研究首次从植食性海水鱼黄斑蓝子鱼中克隆到 PPAR (α、β 和 γ)和 HNF4α 基因，首次研究鱼类中这四个转录因子在不同盐度下 mRNA 表达水平与组织脂肪酸组成的 关系，探讨其在 HUFA 合成调控中的可能作用。研究成果对于丰富鱼类营养学、特别是分 子营养学内容等具有重要的理论意义和学术价值，可进一步为研究蓝子鱼 HUFA 合成的分 子调控机制提供基础。 关键词：黄斑蓝子鱼；PPAR；HNF4α；基因克隆；环境盐度；mRNA 表达；HUFA 生物合成 Abstract Abstract PAGE PAGE IV Abstract Peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) belong to the nuclear receptor family of ligand-activated tra