肌肉注射sRAGE基因对高脂餐大鼠脂质代谢、慢性炎症状态及重要器官的作用-内科学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特另IJDH以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 盟 签字日期：卫年』月卫日 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机 构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名：垂：至茎 指导教师签名：二盏丝一签字目期：』L年』月且臼 肌肉注射SRAGE基因对高脂餐大鼠脂质代溺、 肌肉注射SRAGE基因对高脂餐大鼠脂质代溺、 慢性炎症状态及重要器官的作用 硕士研究生： 刘丽萍 指导教师： 苏本利 教授 专业名称： 内科学 摘 要 背景及目的：高脂餐饮食促使动脉粥样硬化、血脂异常、胰岛素抵抗等发病， 现代生活习惯使之呈流行趋势，近年研究表明慢性炎症和胰岛素抵抗相辅相成。 现代饮食以高脂、高热量为特征，高温烹制的食物富含晚期糖基化终末产物 (AGE)，AGE与与其受体(RAGE)结合，通过NADPH及NF—KB通路，激活巨 噬细胞，可导致氧化应激，引起多种促炎因子产生，一次摄入虽可使循环中AGE 升高，使机体短时间内产生氧化应激状态，炎症因子水平升高，但停止摄入后机 体AGE水平逐渐下降，氧化应激逐渐消退，但如果长期大剂量摄入，则会超出机 体的代偿能力，表现为慢性炎症状态。减少食物中的AGE、阻断AGE与RAOE结合 可降低机体慢性炎症状态，使db／db大鼠胰岛素抵抗减轻，NOD／J,鼠和高脂餐 C57／B6小鼠糖尿病发生减少，糖尿病慢性并发症(动脉粥样硬化、微血管并发症) 减轻。新近研究发现体内存在一种缺失细胞跨膜段及细胞内段的RAGE(又称为 sRAGE)具有与AGE结合的能力，限制了AGE与细胞膜上完整的RAGE结合的能 力，阻断AGE所导致的细胞氧化应激，减轻机体慢性免疫反应状态。本研究的目 的是通过肌肉注射sRAGE基因，观察sRAGE对高脂餐大鼠机体氧化应激状态、脂 质代谢、胰岛素抵抗及主动脉内膜、肝脏、肾脏的改变的影响。探讨肌肉注射sRAGE 基因防治高脂餐大鼠代谢紊乱及重要器官损伤的作用。 方法： 1．动物实验：取SD大鼠28只(体重150～1609，6周龄)，随机分为3组：高脂 餐治疗组、高脂餐对照组和普通餐对照组。高脂餐大鼠先以高脂餐喂养8周，第9 周lO只在双侧后腿肌内各注射pLNCX2．sILAGE 300肛g(高脂餐治疗组)，10只注射 pLNCX2质粒300“∥侧(高脂餐对照组)：分别于第12周、第15周重复注射一次， 第17周处死。8只同期普通饲料喂养的大鼠(普通餐对照组)在第17周处死。骨髂 肌注射pLNCX2．sRAGE平I]pLNCX2质粒方法：4％水合氯醛腹腔麻醉大鼠，暴露双侧 后腿肌肉，各注射质粒300pg，以电极相距20mm给予方波电脉冲(电压200V／cm， 后腿肌肉，各注射质粒300pg，以电极相距20mm给予方波电脉冲(电压200V／cm， 波宽40CM，脉冲次数9，频率IHZ)刺激，以增加基因转移效率。 2．三组大鼠分别于每次注射后的1、2、3周断尾取血测定SOD、MDA值。第17 周处死前测空腹血糖和体重，处死后立即取心脏血、主动脉、肝脏和肾脏，进行 血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇、TNF．0【、超敏CRP、SOD、MDA测定，肾脏 和主动脉病理HE染色，应用免疫组织化学染色观察经不同措施处理的大鼠的肾脏 TGF-B1、肝脏NF—v．B的表达。 结果： 1．高脂餐对照组体重、血糖、血清胰岛素、甘油三脂、总胆固醇、超敏CRP、 TNF一伍较普通餐对照组明显升高，与高脂餐对照组相比高脂餐治疗组除体重和超敏 CRP轻度下降无统计学差异、甘油三脂显著升高外，其余各指标下降有统计学差异。 2．高脂餐治疗组大鼠注射基因后SOD水平逐渐上升，到第1次注射后3周与高 脂餐对照组呈现统计学差异(PO．05)， 高脂餐治疗组大鼠注射基因后血MDA 水平开始下降，1次注射后2周与高脂餐对照组有统计学差异(PO．05)，在1次注 射后3周有所升高；重复注射SOD继续升高，至接近普通餐对照组不再升高，MDA 再