分子生物学幻灯片chapter4DNA复制.pptVIP

Chapter 4 The Replication of DNA ;Introduction;When will the DNA replication happen? ;DNA 复制在细胞周期的S期;（4）细菌(E.coli)DNA每个细胞周期只复制一次;1、Semi-Conservative Replication ;;15N 标记实验; 聚合反应： substrate－－dNTP;;;Correctly paired bases are required for DNA-polymerase-catalyzed nucleotide addition;子链DNA延伸方向只能是5’－3’;? 如果DNA的延伸方向是 3’ → 5’ ;A T C G ; The initiation of a new strand of DNA requires an RNA primer (primase) DNA helicases unwind the double helix in advance of the replication fork Single-stranded DNA- binding proteins stabilize ssDNA prior to replication Topoisomerases remove supercoils produced by DNA unwinding at the replication fork DNA polymerase extend the DNA chain; 1)、 解螺旋酶 （helicase）:又称解旋酶, 通过水解ATP获得能量,解开DNA双链. 2). 单链结合蛋白（SSB): 结合在DNA单链上,有时有协同效应. 3)、 DNA旋转酶 ：消除复制叉前进过程中产生的正超螺旋，产生负超螺旋.;The initiation of DNA replication;（1） OriC in E. coli chromosomal DNA;酵母菌的复制起点称为ARS(autonomously replicating sequence)，有100多个bp。ARS包括一个共有序列(A)和附加元件(B1~B3)。A功能域为ARS的中心，可能是起始蛋白的结合位点。A的序列为(T/A)AAATA(T/C)AAA(T/A)；A元件在芽殖酵母中高度保守，是复制起始所必需的。其中有富含AT的11bp序列是复制起始识别复合物（origin recognition complex, ORC）结合复制起始位点所必需的，对起始因子在复制起始位点的组装起基本作用。 ;;The initiation of DNA replication;primase;; DNA Ligase;DNA polymerase; 三种DNA聚合酶的结构和功能; 3’－5’ exonuclease activity（polymerase I, II, III） 校对功能(proofreading); 5’－3’ exonuclease activity (polymerase I, III) DNApolⅠ的5’－3’外切活性有以下三个特点： ? 必须有5’－磷酸末端 ? 被除去的核苷酸必须是已经配对的 ? 被除去的可以是脱氧核糖核苷酸，也可以是核糖 核苷酸 （切刻平移）; 其中 DNApol Ⅲ 全酶有十种共22个亚基;Interaction between DNA and DNA polymerase;The initiation of DNA synthesis in E.coli; 2、真核生物的DNA聚合酶;Activation of the pre-RC leads to the assembly of the eukaryotic replication fork;The activation of pre-RCs is tightly regulated by cyclin-dependent kinases (Cdks) ; （3）复制终止;; b、专一性终止蛋白 E.coli 中由 tus gene 编码 （terminus utilization substance）