分子生物学幻灯片—原核表达调控-2.pptVIP

二、 转录水平的调控;4. 色氨酸操纵子(trp operon);分枝酸先在邻氨基苯甲酸合成酶作用下生成邻氨基苯甲酸，此后先与磷酸核糖焦磷酸中的磷酸核糖形成磷酸核糖邻氨基苯甲酸，经重排、脱羧和关环形成吲哚甘油磷酸，然后在色氨酸合成酶催化下先脱去3-磷酸甘油醛生成吲哚，最后吲哚与一个丝氨酸缩合形成色氨酸。 ;E.Coli中Trp操纵子的结构 5个色氨酸合成代谢相关酶的基因构成一个操纵子。 合成Trp所需要酶类的5个基因E、D、C、B、A头尾相接串连排列组成结构基因群；受其上游的启动子P和操纵子O的调控。 这些基因只有在缺乏Trp时，才被有效表达。; trp操纵子 ;色氨酸操纵元的调控机制;与lac操纵子的调控不同的是，控制Trp操纵子的阻遏蛋白的效应物（ Trp ）不是一个诱导物（inducer）, 而是一个辅阻遏物（corepressor）。也就是说，Trp操纵子的调节基因的产物（阻遏物蛋白）无???性，不能与操纵基因结合；当Trp存在时，它与阻遏物蛋白结合，诱导该蛋白构象变化，能够结合在操纵基因上并阻止转录。;调控基因trpR的位置远离P-O-结构基因群，在其自身的启动子作用下，以组成型方式低水平表达调控蛋白R’；R’并无活性。 当提供足够的Trp时，Trp与R’结合使其构象改变而成为活性形式R，R可与操纵基因O特异性结合，阻遏结构基因的转录，R的阻遏能力仅为lac I产物的1/1000。;trp操纵子中产生阻遏物的基因是trpR，该基因距trp基因簇很远。后者位于大肠杆菌染色体图上25分钟处，而前者则位于90分钟处。在位于65分钟处还有一个trpS（色氨酸tRNA合成酶），它与携带有色氨酸的tRNATrp共同参与trp操纵子的调控作用。;; 当有足够的Trp时，操纵子自动关闭。细菌直接利用外界的Trp。 缺乏Trp时，Trp操纵子被打开，5个结构基因表达，产生3个酶催化分支酸合成为Trp。 ;这是一种负性调控，操纵子通常是开放转录的。当有效应物(Trp)作用时，诱导使阻遏蛋白R’构象发生变化，能够结合于操纵基因，则阻遏转录。;4.2 色氨酸操纵子的衰减调控;当阻遏物对trp操纵子的阻遏作用被解除，但细胞内仍有一定浓度的色氨酸时，第二种调控机制使trp操纵子的转录在抵达trpE之前被提前终止，这种现象称为弱化作用（attenuation），DNA中导致mRNA合成提前终止的一段序列称为弱化子（attenuator）。弱化作用产生的关键在于trp mRNA的前导区。;在Trp操纵子Ptrp-O与trpE间有一段162bp的先导序列(leading sequence, L)。在L内有一段123~150bp的序列，它在转录起始后可调控转录过程的进行。 这段碱基序列如果缺失，trp基因表达可提高6-10倍。mRNA合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，转录总是在这个区域终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。这个区域被称为弱化子，该区mRNA可通过自我配对形成茎-环结构。 ; 弱化子的共同特点是某些外部因素控制着弱化子的发夹形成。即形成终止子结构。弱化子为结构基因的转录设了一道关卡。;前导肽 分析前导序列发现，它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA，能产生一个含有14个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽。 在前导序列的第10和第11位上有相邻的两个色氨酸密码子。组氨酸操纵子含有7个相邻的组氨酸密码子，苯丙氨酸操纵子也有7个苯丙氨酸密码子，这些密码子参与了操纵子中的转录弱化机制。; 先导序列包括起始密码子AUG和终止密码子UGA，它编码了一个14个AA的先导肽。编码先导肽的第10、11位是相邻的两个Trp密码子。;先导序列含有3对反向重复序列(A=1+2；B=2+3；C=3+4)。;如果B(2+3)形成发夹结构，A和C都不能再形成发夹结构。;当A（1+2）形成发夹结构时，B就不能形成发夹结构，却有利于C（3+4）生成发夹结构。;C后是poly(U)，即C实际是一个终止子，如果转录mRNA时它形成发夹结构，就能使RNA聚合酶停止转录而从mRNA上脱离下来。;mRNA前导区的序列分析 trp前导区的碱基序列已经全部测定，引人注目的是其中4个分别以1、2、3和4表示的片段能以两种不同的方式进行碱基配对，有时以1-2和3-4配对，有时只以2-3方式互补配对。; 无色氨酸时操纵子基因开始转录，此后转录速率受转录弱化机制(attenuation)调节。在结构基因与 O 之间有一衰减子区域 ，该区域含有4段特殊的序列，高浓度色氨酸时能形成不依赖ρ因子的转录终止信号，RNA聚合酶脱落，转录终止。低浓度色氨酸时则不能形成转录终止信号，转录继续。;原核生物转录和翻译几乎