黄斑蓝子鱼参与HUFA合成的三个关键酶基因的克隆及其特性-环境科学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 中文摘要 一般认为，淡水鱼可以通过脂肪酸的去饱和及碳链延长作用将 18C 的亚油酸和亚麻 酸转化为 20-22C 的高度不饱和脂肪酸(HUFA)，而海水鱼的该种能力缺乏或很弱。然而， 最近本课题组在黄斑蓝子鱼(Siganus canaliculatus)中首次发现和证明海水鱼具有转化亚油 酸和亚麻酸为 HUFA 的能力，且该种转化能力在低盐度中水体中(10 ppt)要比在高盐度水 体中(32 ppt)强 (Li et al., 2008)。这提示，蓝子鱼的 HUFA 合成能力似乎兼具淡水鱼和海 水鱼的特点，弄清蓝子鱼 HUFA 合成代谢的调控机制，将有助于探明海水鱼 HUFA 合成 能力低下的原因，研发提高海水鱼 HUFA 合成能力的方法，进而提高海水鱼利用植物油 的能力，促进海水鱼配合饲料的研究和应用及其养殖业的发展。为了研究蓝子鱼 HUFA 合成代谢的调控机制，本论文克隆了调控其 HUFA 合成的两个脂肪酸去饱和酶(fatty acyl desaturases，fad1 和 fad2)及碳链延长酶(Elovl5)的基因(cDNA)，并对其功能特性和组织表 达特性、以及饲料脂肪酸成分对其 mRNA 表达水平的影响等进行了研究。主要结果如下： 1. Fad1 基因为我们之前已克隆但尚未进行功能鉴定的蓝子鱼 Δ6 脂肪酸去饱和酶基 因（登录号：EF424276）。本次功能鉴定显示，该酶不仅具有 Δ6 去饱和活性，同时还具 有 Δ5 去饱和活性，即 Fad1 是一个具有 Δ6/Δ5 双功能活性的脂肪酸去饱和酶，不过 Δ6 去饱和活性要大于 Δ5 去饱和活性。Fad1 的 cDNA 全长为 1846 bp (不包括 Poly A 尾)，编 码 443 个氨基酸。氨基酸序列与已克隆的鱼类 Δ6 或 Δ5 脂肪酸去饱和酶具有 70%?81%相 似性，且具有典型的脂肪酸去饱和酶的结构特性。 2. Fad2 主要表现为 Δ4 去饱和酶活性，也有少量 Δ5 去饱和酶活性。其 cDNA 全长为 1831 bp，编码 445 个氨基酸（登录号：GU594278）。氨基酸序列与已克隆的鱼类 Δ6 或 Δ5 脂肪酸去饱和酶具有 67%?79%相似性，且具有典型的脂肪酸去饱和酶的结构特性。 3. 碳链延长酶基因(登录号：GU597350)具有典型的延长酶 Elovl5 活性，其 cDNA 全 长为 1254 bp，编码 291 个氨基酸。氨基酸序列与与已克隆的鱼类碳链延长酶 Elovl5 的氨 基酸序列具有 69%?83%相似性，且具有典型的碳链延长酶的结构特性。 4. 组织表达特异性研究显示，Fad2 和 Elovl5 在脑、肝脏、肠组织中的 mRNA 表达 水平最高，其次为眼组织，在脾、肌肉、心脏和鳃等组织的表达水平最低或难以检测到。 这表明，肝脏、脑和肠组织可能是蓝子鱼 HUFA 合成的主要部位。 5. 利用苏籽油和三油酸甘油酯为脂肪源，配制亚麻酸:亚油酸比例分别为 0:1、0.5:1、 1:1、1.5:1、2:1 和 2.5:1 但不含 HUFA 的配合饲料为试验组，以添加鱼油的配合饲料作为 I 对照组，投喂蓝子鱼 12 周后分析其肝脏组织中上述三个酶基因的 mRNA 表达水平。结 果显示：苏籽油和三油酸甘油酯组的 mRNA 表达水平均比鱼油组高，但亚麻酸与亚油酸 对酶基因表达的促进作用与饲料中此两种脂肪酸的比例有关。亚麻酸与亚油酸的比例大于 或小于 1:1 时对三个酶基因的表达都有较明显的促进作用，比例为 1:1 时的促进作用最 弱；比例为 2:1 时，对 fad2 去饱和酶及碳链延长酶表达的促进作用明显；比例为 2.5:1 时，对 fad1 去饱和酶表达的促进作用最强。 6. 本研究的主要创新之处包括：① 首次从一种海水鱼中获得具有 Δ6/Δ5 双功能活性 的脂肪酸去饱和酶，也是首次在海水鱼中证明有 Δ5 去饱和酶活性的存在；② 首次在脊 椎动物中报道具有 Δ4 功能的脂肪酸去饱和酶。 研究结果将有助于揭示海水鱼 HUFA 合成调控的分子机制，完善鱼类 HUFA 合成途 径；同时，可为深入开展植物油替代鱼油的研究提供了理论依据；对于丰富鱼类营养学、 特别是分子营养学内容具有重要的理论意义和学术价值。 关键词：黄斑蓝子鱼; HUFA 合成代谢; Δ4 脂肪酸去饱和酶；Δ6/Δ5 双功能脂肪酸去饱和 酶；碳链延长酶; 营养调节 II Abs Abstact III III Abstract It is generally thought that freshwater fish can bioconvert linoleic and α-linolenic into HUFA. In contrast, marine fis