茴香脑对局灶性脑梗死小鼠神经功能及血脑屏障保护作用的机制研究-神经病学专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 茴香脑对局灶性脑梗死小鼠神经功能及血脑屏障保护作用的机制 研究 摘 要 目的：脑血管病是导致全球人类致残和致死的主要病因之一，其中急 性缺血性脑卒中最为常见。脑缺血急性期会发生继发性脑损伤：钙超载、 氧化应激、炎症、凋亡、兴奋性中毒，其中氧化应激和炎症的发生于血脑 屏障的破坏密切相关，血脑屏障破坏又进一步加剧脑损伤，形成恶性循环， 减少继发性脑损伤和保护血脑屏障对脑缺血的治疗至关重要。因此，开发 保护血脑屏障的药物有望成为缺血性卒中的有效策略。茴香脑（Anethole, 简称 AN）又名茴香醚，来源于伞形科植物茴香、果实香根芹、根木兰科植 物八角茴香、果实柏科植物、果实唇形科植物罗勒、全草藿香、全草菊科 植物紫苑 根及根茎。在肿瘤、皮肤损伤、肝损伤等方面均有抗炎作用，本 实验复制小鼠永久性大脑中动脉栓塞模型（permanent middle cerebr alanery occlusion，pMCAO），应用茴香脑进行干预，评价茴香脑对脑缺血的抗炎 作用，和血脑屏障的保护作用，旨在证实其脑保护作用并探讨其可能机制。 方法：采用成年健康雄性的 CD-1 小鼠，应用改良 Longa 线栓法制作 的小鼠永久性大脑中动脉闭塞 （permanent middle cerebral artery occlusion, pMCAO） 模型。1.实验一探究茴香脑对脑梗死急性期小鼠的神经保护作 用。72 只小鼠被随机分为四组（每组 18 只）：Sham 组，pMACO 组，AN 低剂量组（pMACO+AN 40mg/kg）,AN 高剂量组（pMACO+AN 80mg/kg）。 茴香脑干预组在小鼠大脑中动脉栓塞后给药方式为即刻给予腹腔注射，而 相应的 pMCAO 组和 Sham 组则给予等体积的吐温溶剂。各组小鼠（每组 6 只）进行缺血后脑保护作用的检测:包括 24 小时的神经功能评分，24 小 时伊文思蓝含量测定，24 小时脑水含量测定以及 24 小时 TTC 染色法测定 梗死体积。2.实验二对茴香脑在脑梗死急性期小鼠的脑保护及血脑屏障保 护作用机制的探索。各组小鼠（每组 6 只）用蛋白免疫印迹法进行测定缺 血后 24 小时的炎症因子的水平，评价 AN 在脑梗死急性期抗炎作用。测定 缺血后 24 小时的 Claudin-5、Occludin 和 JAM-1 蛋白表达量，评价 AN 保 护血脑屏障的作用。 结果： 1 茴香脑能改善小鼠脑梗死急性期的神经功能缺损 术后 24 小时，对 Sham 组、pMCAO 组、AN 低剂量组、AN 高剂量 组的小鼠进行神经功能的评分，应用 Mann–Whitney U 检验进行统计分析。 其中，除 Sham 组以外，其余小鼠（缺血后小鼠）均出现评分不同的左侧 肢体偏瘫，且神经功能评分明显升高。而药物干预的 AN 低剂量组和 AN 高剂量组神经功能评分明显低于 pMCAO 组，且具有明显的统计学差异（P 0.05）。提示茴香脑能改善小鼠脑梗死急性期的神经功能缺损。 2 茴香脑能降低小鼠脑梗死体积 术后 24 小时，在 pMCAO 组和其他脑缺血小鼠出现苍白色梗死区域。 与 pMCAO 组相比，AN 低剂量组和 AN 高剂量组的脑梗死体积明显减小， 且差异具有统计学意义（pMCAO vs. L-AN, H-AN:73.62% ± 4.83% vs. 38.36% ± 1.16%，43.19%± 1.09%, P 0.05），其中，低剂量组比高剂 量组的脑梗死体积减少的多，但其差异并无统计学意义（P＞0.05）。提示 茴香脑能够降低局灶性脑缺血小鼠的脑梗死体积。 3 低剂量茴香脑能减轻小鼠脑梗死急性期 24 小时的脑水肿 术后 24 小时，Sham 组小鼠梗死侧的脑组织水含量为 82.92% ± 1.11%。而 pMCAO 组小鼠梗死侧的脑组织含水量明显升高至 87.81% ± 0.82%（24 小时）（P 0.05）。给予低剂量茴香脑干预后，脑梗死 24 小 时的脑组织含水量分别降至 86.29% ± 1.31%，与 pMCAO 组相比，其差 异均有统计学意义（P 0.05）。提示茴香脑能减少局灶性脑缺血小鼠脑水 含量，减轻小鼠脑梗死急性期的脑水肿。 4 低剂量茴香脑能够改善小鼠脑梗死急性期血脑屏障的通透性 术后 24 h，通过测量各组小鼠脑中伊文斯兰的漏出量，用来评价血脑 屏障的通透性。其中蓝色区域表示伊文斯兰的漏出的多少，提示血脑屏障 通透性的改变。低剂量茴香脑干预后，小鼠缺血侧脑组织的伊文斯兰透过 量明显低于 pMCAO，其差异有统计学意义（P 0.05）。提示低剂量茴香 脑能够改善小鼠