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C2H5OH + NAD+ CH3CHO + NADH 醇脱氢酶 NADH + [Fe(CN)6]4- NAD+ + [Fe(CN)6]3- + H+ + e- （二）电位型酶电极 电位型酶电极是将酶促反应所引起的物质量的变化转变成电位信号输出，电位信号大小与底物浓度的对数值呈线性关系。 电位型酶电极所用的基础电极是对 某种离子有选择性或对气体有选择性的电极 离子选择性电极 气敏电极 1773年，伊莱尔·罗埃尔（Hilaire Rouelle）发现尿素。 1828年，德国化学家弗里德里希·维勒首次使用无机物质氰酸氨（由氯化铵和氯酸银反应制得）与硫酸铵人工合成了尿素。 弗里德里希·维勒 （Friedrich Wohler） ⑴尿素电极 尿素的分子模型 增高：急性或慢性肾小球肾炎、肾功能衰竭、尿路阻塞、尿路肿瘤、高蛋白质饮食等。 减低：妊娠后期、蛋白质摄入不足、营养不良等。 * 尿素在脲酶作用下发生水解反应 可用氨气敏电极、二氧化碳电极等作为基 础电极测定尿素的含量。 （2）草酸电极 草酸（乙二酸）结构式 ? 维生素C代谢 ? 甘氨酸代谢 ? 草酰乙酸水解 ? 异柠檬酸降解 ? 食物摄入：菠菜、茶叶 生物体内草酸的来源： 草酸 草酸脱羧酶 2CO2 + 甲酸 （3）腺苷电极 ? 参与心肌能量代谢 ? 扩张血流量 ? 合成ATP、腺苷酸的重要中间体 腺苷 腺嘌呤脱氨基酶 肌苷 + NH3 （4）苯丙氨酸电极 ? 哺乳动物的必需氨基酸 ? 是甜味剂阿斯巴甜的主要原料 苯丙氨酸 苯丙氨酸 胺裂解酶 反式肉桂酸盐 + NH3 4.2 酶场效应晶体管传感器(ENFET) ENFET将酶膜复合在ISFET的栅极。 测量时，酶的催化作用使待测分子反应 生成ISFET能够响应的离子。 ISFET工作原理 * 敏感膜与溶液界面产生膜电位，该电位叠加在栅压上，引起场效应管漏电流的变化。根据能斯特方程，膜电位的大小与溶液中的离子活度有关，即: （一）葡萄糖-FET 葡萄糖-FET是由对H+ 敏感的ISFET和固定在其栅极上的葡萄糖氧化酶膜构成的。 酶催化底物反应时，生成葡萄糖酸根、H+ 和过氧化氢，导致酶膜附近pH值变化，且pH的变化量与葡萄糖含量有关。 溶液中H+的浓度变化，离子敏感膜与溶液界面的膜电位发生变化，该电位叠加在栅源电压上，栅源电压的改变与溶液中pH值的变化量成线性关系。 葡萄糖-FET工作原理： 为提高葡萄糖-FET的工作性能和测量精度，可采用两个pH敏感的场效应管构成差动式结构。 双栅极酶-FET传感器 一个FET的栅极固定葡萄糖氧化酶膜，作为工作FET；另一个FET的栅极上没有酶膜，作为参比FET。将2个FET接到差动放大器上，干扰因素被消除，使输出电压只对葡萄糖响应，因此输出电压的变化能够反应葡萄糖含量的变化。 测量葡萄糖酸的葡萄糖传感器：  pH电极和离子敏场效应管测定葡萄糖酸的量来计算样品中葡萄糖的含量，最低检测限为10-3 mol／L，灵敏度较低； 测量氧消耗量的葡萄糖传感器： Clark氧电极用于测定酶促反应中氧的消耗量(电流降低的量)来计算样品中葡萄糖的含量，最低检测限为10-4 mol／L 。 葡萄糖氧化产生H2O2， H2O2通过选择性透气膜，在Pt电极上氧化，葡萄糖的含量与生成的电流成正比，由此可测出葡萄糖的浓度。 检测H2O2的方法的本底电流小，灵敏度高，其最低检出限为10-8mol／L。 测量H2O2生成量的葡萄糖传感器： （2）改进的葡萄糖传感器 为消除环境中氧对测定的干扰，用四硫富瓦烯、二茂铁等容易在电极上氧化还原的介体来代替氧的电子传递作用。电子介体是酶氧化还原活性中心与电极表面之间的电子传递中介物，在电流型酶电极中起着关键性作用。 各种电子传递介体的使用，使得电流型酶传感器的响应速度、检测灵敏度和选择性都得到了很大的提高。 方法：将葡萄糖氧化酶和电子介体同时包埋于聚合物膜中，或直接修饰于电极的表面构成葡萄糖酶传感器。 在葡萄糖氧化酶（ ）的催化下，葡萄糖被氧化为葡萄糖酸，再由二茂铁离子将还原型葡萄糖氧化酶（ ）氧化为氧化型葡萄糖氧化酶（ ），然后二茂铁在电极上氧化成二茂铁离子，通过二茂铁在电极上产生的氧化电流来实现葡萄糖含量的检测。 * 介体传感器的特点： 仅用较低的电压就能使介体氧化。 传感器对氧不敏感，能在缺氧和氧浓度 变化的