美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究-眼科专业毕业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作 及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方 外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为 获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与 我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的 说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 趁 学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保 留、使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部 门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保 存、汇编学位论文。 论文作者签名 指导教师签名 签字日期： 美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞 美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞 保护作用的实验研究 硕士研究生： 王玲 指导教师： 李静敏教授 专业名称： 眼科专业 摘 要 目的：青光眼是由于眼压升高而引起视乳头损害和视野缺损的一种 致盲性眼病，视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，ROC)进行性死亡是 其特征性改变，因此，我们治疗的最终目标在于阻止RGC的损害和保护 视功能。多种因素在青光眼的发病中起重要作用，大量研究表明RGC的 丢失可能与谷氨酸(GLU)毒性有关，其兴奋毒性损伤主要是由于对N 一甲基一D．天冬氨酸(N—methyl—D．aspartatc，NMDA)受体的过度刺激 引起的。美金胺(Memantine)是一种非竞争性NMDA受体拮抗剂，本实 验通过对急性高眼压大鼠对照应用Memantine，观察大鼠眼的病理组织 学变化、凋亡基因Caspase．3的表达及RGC凋亡情况，为青光眼的临床 治疗提供理论依据。 方法：健康成年Wistar大白鼠48只，体重2003009，无眼疾，雌 性，随机将其分为三组：健康对照组(A组)8只、急性高眼压对照组 (B组)20只和美金胺治疗组(C组)20只。将Wistar大白鼠予3％戊 巴比妥钠30mg／kg腹腔注射，完全麻醉后将连接生理盐水瓶的5号半针 头沿颞侧角膜缘刺入鼠的前房，然后升高输液瓶至与动物眼部垂直距离 为146厘米处，此高度可在眼内形成ll 0mmHg的眼压。60分钟后将针 头取出，恢复视网膜血流灌注，眼底检查可判定。此时C组腹膜腔内注 射美金胺，B组腹腔内注射生理盐水，A组不予升高眼压。分别于高眼 压后6h，24h，72h处死大白鼠，迅速摘除眼球。光镜下行眼的病理组织 学观察、免疫组织化学方法检测Caspase一3表达及TUNEL染色观察细胞 凋亡情况。 结果： 1、眼部情况 B、C两组急性高眼压1h后，角膜水肿混浊，未见前房出血；48h后 角膜水肿减轻。A组角膜透明，无前房出血。 2、常规组织病理学检查B组大鼠急性高眼压6h，视网膜明显水肿，主要在神经节纤维层、内 2、常规组织病理学检查 B组大鼠急性高眼压6h，视网膜明显水肿，主要在神经节纤维层、内 核层较明显，结构尚完整；急性高眼压24h，视网膜水肿逐渐加重，部分 神经节纤维细胞发生变性；急性高眼压72h，视网膜水肿较24h时明显减 轻，大部分神经节纤维层发生空泡变性，水肿基本消失，核溶解、坏死， 结构较紊乱。C组大鼠急性高眼压6h、24h水肿明显减轻，72h节细胞层 受损减轻。A组均为正常视网膜结构。 3、Caspase．3免疫组织化学染色 在A组大鼠视网膜基本无Caspase．3阳性细胞表达，而在B、C组 Caspase．3表达阳性细胞主要为RGC，阳性物质位于胞质，分布不均，呈 棕色或浅棕色显色。B组6h开始出现Caspase．3的表达，24h达高峰， 72h下降。C组各观察指标变化趋势基本同B组，但各时间段的表达强 度明显减弱，两组比较，于高眼压6h、24h、72h时段的差别均具有统计 学意义。 4、TUNEL染色 在A组，大鼠视网膜基本无TUNEL染色阳性细胞表达。B组TUNEL 染色阳性细胞主要为RGC，在高眼压后6小时开始出现，24小时明显增 多，72小时TUNEL染色阳性细胞减少；C组亦在高眼压后6小时开始 出现TUNEL染色阳性细胞，24小时增多，72小时减少；但在C组视网 膜TUNEL染色阳性率则明显低于B组，两组比较，于高眼压6h、24h、 72h时段差别均具有统计学意义。 结论： 1、急性高眼压损伤后RGC有Caspase．3的高表达，表明Caspase．3的 活化与高眼压后RGC凋亡有关。 2、在急