棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究及棉铃虫细胞系的建立-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docx

山东人学博i‘论文致 山东人学博i‘论文 致 谢 四年前，我的导师赵小凡教授给了我一次转博的机会，我才能有今天的收获。是 她!四年来带领我步入昆虫细胞分子生物学研究的大门，我的论文就是在她的悉心关 怀和指导下完成的!多年来我一直非常敬仰的王金星教授，在我论文完成过程也给予 了很多指导，并以其独到的见解提出了一些关键性的问题。两位老师渊博的学识，敏 锐的观察力，勤奋忘我的工作精神，严谨的科学态度和与人为善的美好品德是我终生 学习的榜样。在此，向两位导师致以我崇高的敬意和真挚的感谢! 感谢实验室的每一位同学在我论文完成过程中给予的热情帮助。董杜鹃同学在我 的论文完成中始终是我最信赖的好帮手，扈进冬、康翠洁、柴连琴、迟光红、郑薇薇、 张新昌、张玉宝、杜欣军、薛剑锋、王来城、贺红娟、付强还有同实验室的其他学友 等都给予了我热情的帮助。四年来，在实验室罩与每一位同学一起学习、一起工作， 大家互帮互助，互相促进，使我感到实验室就是我另一个温馨的家。 我工作单位的辛华教授给予了我许多支持，我的细胞培养技术就是她多年前细心 指导的结果，在此向她表示衷心的感谢!我还要感谢其他同事们在我读博期间给予我 的理解、支持和帮助! 感谢我的家人及亲友们四年来给予我的支持和照顾! 本研究得到国家高技术研究863计划(2003AA214050))，国家自然科学基金重点 项国家自然基金30330070)和山东省自然科学基金 (Z2003D04)的资助，在此一并表示感谢! 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：兰唑日 期：2。口f·t2． 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：盟!：耋论文作者签名：盥!：垒 导师签名：垒：!：＆日期：兰：!：!!：；导师签名：二笙：!：坐日期：兰：!：!：：二 山东大学博士论文棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究及棉铃虫细胞系的建立 山东大学博士论文 棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究及棉铃虫细胞系的建立 摘要 棉铃虫是鳞翅目夜蛾科昆虫，因摄食杂，食量大，繁殖力强，严重危害我国农业 经济。用化学药物控制害虫，害虫会逐渐产生抗药性，给防治带来更大的困难，同时 化学药物也给人类健康带来不利。通过体内、体外研究方法，深入掌握害虫发育规律 及机理，从生物学角度设计扰乱害虫生长或借用天然病原体控制害虫的生物防治具有 针对性强，特异性高，对人类及环境无污染等优点，具有广阔的发展前景。 本论文在实验室前期工作基础上，进行了两种棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂的 实验研究，为筛选新的重组病毒候选基因提供实验证据。论文还探索建立了三种体外 连续传代的棉铃虫细胞系，为进一步在体外研究棉铃虫活体细胞的激素调控、病毒感 染、细胞凋亡等分子生物学机制奠定了基础。现将论文内容概括如下： 第一部分：棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究 杆状病毒中绝大部分是昆虫特异性病原，因不感染脊椎动物，是理想的控制害虫 的生物“工具”。然而根据研究得知，野生型杆状病毒具有杀虫谱窄，杀虫速度慢的 缺点。遗传改造病毒，选用外源基因构建重组病毒，使重组病毒感染虫体后除了病毒 的毒杀作用外还通过外源基因的持续表达双重干扰昆虫，以加快害虫的死亡、提高害 虫的死亡率，大大减少农林业的经济损失。已报道了多种基因重组病毒，如蝎毒素、 螨毒素、利尿激素、保幼激素酯酶等基因的重组病毒，其杀虫效果虽都优于相应的野 生型病毒，但仍不理想。新的安全高效的基因重组病毒候选基因需要探索和发现。 棉铃虫激素接受子3(Helicoverpa hormone receptor 3，HHR3)是蜕皮激素直接诱 导的棉铃虫蜕皮调节转录因子激素接受子3，是棉铃虫蜕皮级联反应过程的关键调控 因子，HCB(Helicoverpa armigera eathepsin B-like proteinase)是参与棉铃虫胚胎发育 及成虫脂肪体降解的半胱氨酸蛋白酶。实验室前期工作已将两个基因分别定点插入双 启动子表达载体pFastBaeDUAL(即plO启动子