慢性乙型肝炎患者肝组织内HBVX基因启动子甲基化与临床关系的初步研究-临床医学;内科学传染病专业毕业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 检测慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织中HBV X基因启动子甲基化程度，并 对其甲基化水平与临床关系进行初步探讨。 方法 收集2009年7月_2010年3月在天津市传染病医院住院的慢性乙型肝炎患 者肝组织标本和血清标本各45例，其中HBeAg(+)30例，HBeAg(．)15例，年龄 16_一65岁。所有病例均符合2005年中华医学会肝病学分会、感染病学分会联合 制订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的慢性乙型肝炎诊断标准。检测所有患者 血清丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase，ALT)、门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate aminotransfcrase，AST)及总胆红素(total bilimbin，TBiL)水平。 应用电化学发光免疫分析法定量检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B S antigen，HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(Hepatitis B e antigen，HBeAg)水平。 应用免疫组化方法检测肝组织内HBsAg、乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen，HBcAg)的表达。应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方 法检测血清HBV DNA水平。利用MethPrimer软件分析预测HBV DNA CpG岛， 同时采用高分辨率熔解技术(High Resolution Melting，HRM)检测HBVX基因 启动子CpG岛甲基化水平。 结果 1． 45例肝穿标本免疫组化结果：HBsAg(+)：35例，HBsAg(一)：10例； HBcAg(+)23例，HBeAg(-)：22例。 2． 45例肝组织标本中，共检测到HBV发生甲基化21例(21／45，46．7％)， 其中血清HBeAg(+)：10例(10／21，47．6％)，免疫组化HBsAg(+)：11例(11／21， 52．4％)，HBcAg(+)7例(7／21，33．3％)；HBV未发生甲基化24例(24／45， 53．3％)，其中血清HBeAg(+)：20例(20／24，83．3％)，．免疫组化HBsAg(+)24 例(24／24，100％)，HBcAg(+)-16例(16／24，66．7％)。分别比较甲基化组和 未甲基化组患者血清中HBeAg、肝组织中HBsAg、HBcAg的阳性表达率，差异 有统计学意义(氏0．05)。 3． 甲基化组与未甲基化组慢性乙型肝炎患者，在性别构成、年龄、血清生 化学指标』蝴、AST、TBiL以及病毒学指标HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平 天津医科大学硕士学位论文等方面差异没有统计学意义(p0．05)。 天津医科大学硕士学位论文 等方面差异没有统计学意义(p0．05)。 4． 21例发生甲基化的肝组织标本中，血清HBeAg(．)组甲基化水平 (61．454-18．27)与HBeAg(+)组(34．104-16．03)比较，差异有统计学意义(t---3．631， P0．01)；HBeAg(。)组血清HBV DNA水平(4．32+1．57)与HBeAg(+)组(7．03+1．57) 比较，差异有统计学意义(t--5．100，P0．01)。 5． 21例发生甲基化的患者中，血清HBV DNA水平与HBV DNA甲基化水 平呈负相关(r---0．832，PO．01)，HBeAg水平与HBV DNA甲基化水平呈负相 关(rs-．0．657，P0．05)；HBV DNA甲基化水平与患者年龄呈负相关(rs=-0．706， P0．05)，而与血清HBsAg、ALT、AST、TBiL水平均无相关性(rs值分别为0．165、 0．432、0．24、0．291，P0．05)。 结论 1．HBV DNA CpG岛2存在于HBV C基因型(AB540585)第1228—1665 位碱基序列中，存在于HBV B基因型(AB540582)第1246—1672位碱基序列中， 岛2与HBV增强子。I、X基因启动子区域重叠，紧邻增强子II和C基因启动子。 2． 甲基化组慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝组织HBsAg和HBcAg的阳 性表达率显著低于未甲基化组。发生甲基化的慢性乙型肝炎患者中，HBeAg阳 性组血清甲基化水平低于HBeAg阴性组，HBV DNA水平高于HBeAg阴性组。 血清HBV DNA、HBeAg水平与肝组织内HBV X基因启动子CpG岛甲基化水 平呈负相关。提示HBV X基因启动子CpC岛甲基化可能抑制了血清中HBeAg 的表达和肝组织内HBsAg和HBcAg的表达以及HBV DNA的复制。 3． 甲基化组与未甲基化组慢性乙型肝炎患