慢性胃炎脾虚证消化吸收障碍亚型差异表达基因生物信息学及临床研究-中西医结合临床专业毕业论文.docx

诊断扩散型大B细胞淋巴瘤设计的基因芯片能用来区分出影响预后的两种临床类型， 诊断扩散型大B细胞淋巴瘤设计的基因芯片能用来区分出影响预后的两种临床类型， 它们的病理相同，但却有着决然不同的两种基因特征及临床预后。但是，中医证候与 西医疾病是不同的两个科学体系，中医的证候具有哲学思维，具有抽象性、模糊性、 非定量的特点，是一个多因素参与和调控的，具有时空性、系统性、层次性、非线性 表达及以“候”为证的复杂的临床症候群的反应，因此，中医证候的基因差异表达结 果的可重复性受到较大质疑，同时，中医证候基因差异表达谱有什么不同于西医疾病 的特点，均有必要进行更深入的研究。慢性胃炎是一种胃粘膜的慢性炎症性病变，脾 虚证是其主要证型之一。本课题组根据脾虚证临床症状较多而患者具体表现不一的情 况，从脾虚证的临床表现中把与消化吸收关系密切的症状列出，组成慢性胃炎脾虚消 化吸收障碍亚型，以使研究更集中于某一类型的患者。我们在前期研究工作中，发现 在慢性胃炎脾虚证消化吸收障碍亚型(以下以脾虚证简称)患者中，脾虚证患者的胃 粘膜基因表达与与正常人和脾胃湿热患者存在明显差异，脾虚证患者在蛋白质合成代 谢、免疫功能、能量及物质代谢相关基因的表达总体表现为下调趋向。据此，本研究 拟重复我们第一批慢性胃炎脾虚证基因差异表达谱的实验工作，考证两批慢性胃炎脾 虚证芯片差异表达基因的重复性及差异性，并在此基础上通过对证候症状体症及基因 芯片差异表达基因及其编码蛋白功能的生物学信息分析，描绘出脾虚消化吸收障碍亚 型差异表达基因的病理生理背景的假设，进一步完善脾虚消化吸收障碍亚型诊断标 准。 研究方法 1、病例选择 受试病例首先需要符合慢性胃炎诊断标准(临床、胃镜及病理诊断)，然后符合 脾虚证／脾胃湿热证辨证标准，同时要排除消化道器质性病变及其他系统严重病变者。 脾虚证辨证标准：主症①舌质淡、舌体胖或有齿印，苔薄白；②胃纳减少或食欲 差；③腹胀；④大便溏或腹泻；次症：①消瘦：②体倦乏力；③脉细弱。判断：1) 主症①必备。2)兼具主症②、③、④之二；或兼具主症②、③、④之一，同时兼具 两个以上次症，诊断即可成立。 脾胃湿热证辨证标准：主症①舌苔黄腻；②胸闷；③胃脘痞满或胀痛；④食欲不 振。次症：①口苦而粘；②口渴而少饮，或喜热饮：③大便溏，或有粘液；④恶心； ⑤身困乏力；⑥脉濡缓，或滑。判断：1)主症①必备。2)兼具主症②、③、④之二， 或兼具主症②、⑧、④之一，同时兼具两个以上次症；或兼具3个以上次症，诊断即 可成立。 正常健康者选择标准：临床辨证无明显异常，舌象脉象正常。胃镜下及病理检查 胃粘膜无明显病变者。 2、收集标本 在广州中医药大学第一附属医院和广东省中医院按照上述标准收集慢性浅表性 2 胃炎脾虚证患者作为试验组(脾虚)，慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者作为同病异证 胃炎脾虚证患者作为试验组(脾虚)，慢性浅表性胃炎脾胃湿热证患者作为同病异证 证型对照组(脾胃湿热)，从志愿者中选择健康人作为正常对照组(正常)。参照中华 医学会消化病学分会2000年并冈山会议标准，经胃镜和病理活检确诊，排除心、肝、 脾、肺、肾系等疾患。于(早8：30一11：oo)经胃镜下诊断也符合纳入标准后，胃镜 下钳夹胃窦部(距幽门口2-3cⅢ)粘膜组织4至5块，取1-2块置于lo％福尔马林液中 各做病理切片，其余马上置于RNAIATER中，液氮保存，以备制作表达谱芯片 BiostarH-140s。 3、临床病例资料分析： 对临床所取胃粘膜的若干病人的一般临床资料及症状体征等进行分析，以期发现 症状体征的关联性，比较慢性胃炎脾虚证与湿热证之间的症状差异，并对脾虚证进行 程度分级，寻找对脾虚证程度分级有诊断意义的症状体征。 4、总刚A提取 将液氮保存的样品用碾钵碾磨成粉末状后，转移至已经加入适量UNLzol试剂的 匀浆管中匀浆。将匀浆液4℃，12000 g，离心10min。小心吸取上清液，15-30℃放置 5 min。加入氯仿，震荡，15-30℃放置3 mill，40，12000 g，离心15 mill。吸取上清， 加入异丙醇，充分混匀，15--30℃，放置10rain，4．0，12000 g，离心10rain。弃去上 清，缓慢加入75％乙醇5 ml，洗涤，小心弃去乙醇。再加入75％乙醇10 ml，短暂涡旋， 4．0，8000 g离心10 mill。小心弃上清，短暂离心，吸去上清，干燥沉淀5 min。加入 RNase-free的MiUi．Q水，完全溶解RNA沉淀后，取适量时峪采用核酸定量分析仪和 琼脂糖凝胶电泳检测质量，余．∞℃保存。 5、探针标记 按照UNIGENE芯片杂交试剂盒说明书操作如下：将配制好的预杂交液放入95℃ 水浴锅内交性2 mill，将待预杂交的玻片放入95℃水浴锅内变性30