壳聚糖及其季铵盐对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响.pdf

·８５４· 检验医学２０１２年１０月第２７卷第１０期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１２，Ｖｏｌ２７．Ｎｏ１０． 文章编号：１６７３８６４０（２０１２）１００８４９０５　　　中图分类号：Ｒ４４６．６３　　　文献标志码：Ａ 壳聚糖及其季铵盐对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响 １ ２ ２ ２ ３ ４ ２ ５ 林　萍 ，　赵雨 ，　吴　悦 ，　张　骁 ，　郭晓奎 ，　谭红略 ，　李擎天 ，　孙　阳 （１．上海交通大学医学院附属上海市精神卫生中心检验科，上海２０００３０；２．上海交通大学医学院附属 瑞金医院检验系，上海２０００２５；３．上海交通大学医学院病原生物学教研室，上海２０００２５； ４．上海交通大学医学院附属上海市第九人民医院，上海２０００１１； ５．上海市同济医院医学科学研究所，上海２０００６５） 　　摘要：目的　探讨壳聚糖（ＣＨＩ）及其衍生物可能具有的广谱抗菌作用。方法　采用 ＣＨＩ、壳聚糖季铵盐 （ＱＣＨＩ）进行铜绿假单胞菌体外抑菌试验。采用ＣＨＩ和ＱＣＨＩ分别作用０、３、６、９、１２ｈ，每个时间点取 １ｍＬ菌液 进行菌落计数并与对照孔比较，同时抽提铜绿假单胞菌ＲＮＡ，扩增其ａｈｐＦ、ｐａ３１８７、ａｐｒＡ和ｒｐｏＳ基因，并检测各 基因表达水平；剩余铜绿假单胞菌用ＬＢ培养基培养３ｄ，ＰＢＳ缓冲液冲洗浮游细菌，结晶紫染色，９５％乙醇脱色 后用酶标仪５７０ｎｍ检测并比较铜绿假单胞菌生物膜的形成能力。结果　与对照孔比较，自６ｈ起ＣＨＩ和ＱＣＨＩ 孔的存活菌量即有明显差异（Ｐ＜０．０５）；但 ＣＨＩ孔和ＱＣＨＩ孔之间差异无统计学意义。ＣＨＩ和ＱＣＨＩ均可使铜 绿假单胞菌ｐａ３１８７基因表达上调，ａｐｒＡ基因表达下调；ＱＣＨＩ可使ａｈｐＦ基因表达下调，而ＣＨＩ可使ａｈｐＦ基因表 达上调；ＱＣＨＩ对ｒｐｏＳ基因的表达有下调趋势。从６ｈ起，ＣＨＩ和ＱＣＨＩ对铜绿假单胞菌生物膜的形成均有明显 的抑制作用。结论　ＣＨＩ及ＱＣＨＩ能在一定程度上抑制铜绿假单胞菌的增殖及其生物膜的形成。 关键词：壳聚糖；壳聚糖季铵盐；铜绿假单胞菌；抑菌试验；生物膜形成 　　ＴｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｃｈｉｔｏｓａｎａｎｄｑｕａｔｅｒｎｉｚｅｄｃｈｉｔｏｓａｎｏｎＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａｂｉｏｆｉｌｍｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ＬＩＮ １ ２ ２ ２ ３ ４ ２ ５ Ｐｉｎｇ，ＺＨＡＯＹｕｆａｎ，ＷＵＹｕｅ，ＺＨＡＮＧＸｉａｏ，ＧＵＯＸｉａｏｋｕｉ，ＴＡＮＨｏｎｇｌｕｅ，ＬＩＱｉｎｇｔｉａｎ，ＳＵＮＹａｎｇ．　（１． ＤｅｐａｒｔｅｍｔｎｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＭｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈＣｅｎｔｅｒ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ， Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００３０，Ｃｈｉｎａ；２．ＦａｃｕｌｔｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，ＲｕｉｊｉｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００２５，Ｃｈｉｎａ；３．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰａｔｈｏｇｅｎｉｃＢｉｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００２５，Ｃｈｉｎａ；４．ＳｈａｎｇｈａｉＮｉｎｅｔｈＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００１１，Ｃｈｉｎａ；５．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＴｏｎｇｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ， Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００６５，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｂｒｏａｄｓｐｅｃ