黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达模式的研究-动物遗传育种与繁殖专业毕业论文.docxVIP

黄牛卵母细胞和早期胚胎HATl基因表达模式的研究摘要 黄牛卵母细胞和早期胚胎HATl基因表达模式的研究 摘要 组蛋白乙酰化和去乙酰化可以改变染色质的结构，参与基因的表达调 控和重编程。组蛋白乙酰基转移酶1(Histone acetvltransferases 1，HATl) ．主要在细胞质内对合成的组蛋白进行乙酰化修饰，调控组蛋白的乙酰化水‘ 平。因此，研究卵母细胞成熟过程及早期胚胎发育过程中HATl基因的表 达模式，对深入了解动物个体的发生机理具有重要意义。 本研究首先以本地黄牛GV期卵母细胞mRNA为材料，根据黄牛在 GenBank上的序列设计目的基因HATl和内参基因SDHA的特异性扩增引 物，通过反转录聚合酶链式扩增(RT-PCR)获得特异性扩增条带，经克 隆测序验证，成功获得目的基因片段。HATl和SDHA引物的扩增效率分 别为106％和97％，可以用2‘△△a法对基因表达进行定量统计分析。 然后，收集黄牛GV期卵母细胞、M II期卵母细胞，体外受精(IVF) 和孤雌激活(PA)方法得到24细胞、8．16细胞、桑椹胚和囊胚等实验材 料，进行HATl的实时定量PCR分析。结果发现，HATl基因在黄牛GV期 卵母细胞、M II期卵母细胞、IVF胚胎24细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚 中的相对表达量分别为1．00、0．56、0．09、0．55、0．43和O．31，在PA胚胎24 细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为0．55、0．55、0．48 和O．46。HATl在GV期相对表达量最高，在IVF胚胎中24细胞表达量最少 (PO．05)；在PA胚胎中，mRNA相对表达量相对稳定无明显波动。 以上结果表明，早期胚胎HATl基因的相对低表达可能与受精后的父 源染色质重编程有关；PA胚胎HATl基因的相对稳定表达可能与父源基因 没有参与胚胎发育有关。 关键词：黄牛卵母细胞早期胚胎组蛋白乙酰化酶表达模式 STUDIES STUDIES ON EXPRESSION PATTERNS OF HATl GENE IN CATTLE OOCYTES AND EARLY EMBRYOS ABSTRACT Histone acetylation and de．acetylation can change the structure of chromatin，involving in gene expression regulation and nuclear reprogramming．Histone acetyltransferase 1(HATl)takes part in the acetylation modification of new synthesized histones in cytoplasm and regulation acetylation level of histones．Investigation the expression patterns of HATl in oocytes’maturation and early embryonic development process is of great significance in understanding the genesis of early animals． High quality mRNA was purified from cattle germinal vesicle(Gv) oocytes and reverse transcripted to cDNA．Two pairs of specific primers were designed according to the cattle’S sequence in GenBank，for amplifing the target gene HATl and internal control gene SDHA．With the cDNA as template we successfully amplified the HATl and SDHA fragment，which were cloned and sequenced in the following．The amplification efficiency of HATl and SDHA genes were 1 06 percent and 97 percent respectiveIV，So it could be used for statistically and quantitatively analysing the expression patterns of these gene