米诺环素对戊四氮致痫大鼠海马的保护作用-儿科学专业毕业论文.docxVIP

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河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 1 研魁签确三一导师签砌警学院领导虢多卜 碲年乡月汐旷 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名欹净 导师签名: ≯吼鬈气≥孓0℃ 中文摘要米诺环素对戊四氮致痫大鼠海马的保护作用 中文摘要 米诺环素对戊四氮致痫大鼠海马的保护作用 摘 要 癫痫(epilepsy,EP)是一组由大脑神经元异常放电所引 起的以短暂性中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾 病。癫痫发作可导致神经元损伤,其中有一部分是通过细胞 凋亡实现的。其中NMDA受体介导的兴奋性毒性是神经元 损伤的重要机制之一。谷氨酸是脑内最主要的内源性兴奋性 氨基酸。在癫痫、脑外伤号慢性退行性神经疾病等病理过程 中,谷氨酸通过激动其突触后膜谷氨酸受体产生兴奋性毒 性,参与神经元损害,以NMDA受体介导的兴奋性毒性为 主。NMDA受体亦可介导癫痫脑损伤病理中神经胶质细胞 活化及产生损伤性物质(如iNOS,ICE等)释放。米诺环素(盐 酸二甲胺四环素,minoeyeline hydroehloride)为第二代人工 半合成四环类抗生素,其抗菌谱与四环素相似。近年一些研 究表明,在脑缺血、脑外伤、阿尔茨海默氏病和帕金森病及 边缘叶癫痫发作大鼠模型上,米诺环素均有显著的神经保护 作用。由于米诺环素口服后迅速被吸收,脂溶性较高,组织 穿透性好,且可以通过血脑屏障作用于中枢神经系统,所以 更加引起人们的重视。目前,已报道该类药物神经保护作用 的一些机制,米诺环素在各种模型上均表现出了神经保护作 用,但其在全身性癫痫模型上对神经元的保护作用,以及药 物剂量与神经元的保护作用的关系尚未报道。在全身性癫痫 模型中米诺环素能否拮抗NMDA受体,能否抑制NMDA 中文摘要受体介导的兴奋性毒性,其抑制NMDA受体的兴奋性毒性 中文摘要 受体介导的兴奋性毒性,其抑制NMDA受体的兴奋性毒性 是否通过直接环节发挥作用,米诺环素能否减少凋亡的发生 是本实验关注的焦点。 目的:用戊四氮(Pentylenetetrazol,PTZ)制造癫痫大鼠 模型,用不同剂量的米诺环素进行干预,检测海马区中细胞 凋亡,海马CAl、CA3区NMDA受体型亚单位(NRl)表达 情况,进一步探讨不同剂量米诺环素对致痫大鼠神经元的作 用,米诺环素是否能直接拮抗NMDARl。 方法 1分组 采用完全随机设计。将60只成年雄性Sprague—Dawley (SD)大鼠随机抽取8只作为正常组(normal),其余52只用戊 四氮制造癫痫模型,筛选造模合格大鼠32只随机分为:戊四 氮致痫组(PTZ)和致痫后米诺环素每次20mg/kg干预组 (MTI)、致痫后米诺环素每次45mg/kg干预组(MT2)、致 痫后米诺环素每次90mg/kg干预组(MT3)。 2造模 正常组腹腔注射生理盐水,致痫大鼠按45mg/kg腹腔注 射PTZ溶液,每次注射间隔48d,时,直到点燃(出现Racine V级)。 3给药 各米诺环素干预组于癫痫终止后30分钟内给予米诺环 素灌胃。MTl组首剂给予40mg/kg,以后每12小时给予 20mg/kg。MT2组首剂给予90mg/kg,以后每12小时给予 45mg/kg。MT3组首剂给予180mg/kg,以后每12d,时给予 90mg/kg。PTZ组和正常组给予蒸馏水灌胃d共灌胃5天。 中文摘要4脑电图 中文摘要 4脑电图 将大鼠麻醉后固定于固定架上,采用头皮针状电极单极 导联法,于大鼠顶骨正中左右两侧头皮下处留置针灸针,待 大鼠清醒后制作模型,观察痫性放电的频率及其振幅变化。 5免疫组织化学染色 麻醉状态下经左心室行主动脉插管,4%多聚甲醛溶液 进行灌注,取脑固定,常规包埋,标本冠状位石蜡切片。经 过抗原修复、小牛血清封闭后,)JIJNMDARl抗体,在经二 抗、三抗孵育,DAB显色后置显微镜下观察记录。 6原位末端标记DAN片段 灌注,固定,常规包埋,切片同上。经脱蜡、蛋白酶消 化后,加入TUNEL反应液,滴加复合液,DAB显色,置镜下 观察。 结果 1癫痫行为学 造模大鼠均出现不同程度的痫性发作

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