绵羊多胎性状差异表达microRNA的筛选与靶基因验证-动物遗传育种与繁殖专业毕业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究：!I：：作及取得的研 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究：!I：：作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人 已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获褥趋a垦盛些盘鲎或其他教育机构 的学位或证书丽使用过的材料。与我～同：I：作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：翰舍．签字㈣弘r占年6月弓日 学位论文版权使用授权书 本学位沦文作者完全了解塑a垦叁些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定， 何权保留并向嘲家有关部门或机构送交沦文的复印件和l磁擞，允许沦文被查阅和借 阅。本人授权趣a堡垒些盘堂可以将学位论文的全部戏部分内容编入有关数据库进 行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：役新宦 翮虢历伽也 签字F{别：刃，占年6月另日 签字H划：砷f 6年6月哆翻 学位论文作者毕：!!l址后去向： ：1：作棼位： 电话： 邮编： 万方数据 ／／ll『／I／I。／／ll／／／1lllu／ll／／u／ll／／6ll／／／／够i／iH／ll／／ll／试验所属项目及资金来源 ／／ll『／I／I。／／ll／／／1lllu／ll／／u／ll／／6ll／／／／够i／iH／ll／／ll／ 试验所属项目及资金来源 河北省高等学校科学技术研究青年基金项目 (QN201 5 162)；河北省首批青年拔尖人才支持计划 (201 3—201 5)；河北农业大学青年学术带头人支持项目 (2015-2017)。 万方数据 摘要 摘要 小尾寒羊产羔率高，平均产羔率为281．9％，而吐鲁番黑羊是典型的产单羔绵 羊，单羔率为99．3％。多胎性状是绵羊的重要经济性状之一，是决定繁殖率的关键 因素之一。然而，多胎性状是受多基因控制的且遗传力低，利用传统的选择方法培 育新的高繁殖率品种是相当繁琐的。构建小尾寒羊和吐鲁番黑羊卵巢组织miRNA 表达谱，筛选与绵羊多胎性状相关的miRNAs，为培育新高繁殖率品种提供新的方 向。 本研究采用高通量测序技术，构建了小尾寒羊和吐鲁番黑羊发情期、间情期四 个卵巢组织样品的miRNA cDNA库。 结果表明：四个样品组织分别获得了1066727110793522条纯净reads；对这些reads进行长度分 布统计，在22nt处达到峰值；采用miRDeep程序对测序结果进行分析，在四个卵 巢样品中分别获得194、191、188、187个miRNAs，其中已知miRNA分别为135、 134、136、129个，未知miRNA分别为59、57、52、58个；oar-miR．99a是小尾寒 羊间情期表达量最为丰富的miRNA，而oar-miR．143是小尾寒羊发情期、吐鲁番黑 羊发情期和间情期三个样品中表达量最丰富的miRNA。通过对同一个体发情期和 间情期表达的miRNAs进行比较，筛选出小尾寒羊发情期与间情期中3个显著差异 表达的miRNAs(1092Foldchange一1)，吐鲁番黑羊发情期与间情期存在19个显著 差异表达miRNAs(1092Foldchange一1)，对其靶基因进行GO富集和KEGG通路 分析，推测差异表达的miRNAs通过代i9}和免疫途径调控绵羊相关的繁殖过程：通 过多胎与单胎羊之间的比较，筛选出小尾寒羊与吐鲁番黑羊间情期之间34个差异 表达的miRNAs(1092Foldchange一1)，推测这些miRNAs与绵羊多胎性状相关， 为培育新的高繁殖率品种提供新的方向和思路。 采用荧光素酶报告分析实验对miR．150、miR一27a进行靶基因的验证。试验结 果表明：StAR基因为miR一150的一个靶基因，而CREBl不是miR-27a的靶基因。 StAR为固醇类激素生成过程中重要的限速酶，推测miR-150是通过作用于StAR影 响孕酮的生成，从而对绵羊的卵泡发育、排卵、排卵数、产羔率产生调节作用。而 miR．27a不是通过CREBl调节绵羊的繁殖活动。 利用实时荧光定量PCR检测oar-miR一23b、oar-miR一200b、oar．miR．150、 oar-miR．1 9b、oar-miR-1 94、oar-miR．200a、oar-miR．27a、oar-miR一143在小尾寒羊和 吐鲁番黑羊间情期与发情期4个卵巢样品中的表达量，试验结果表明：实时荧光定 量PCR与高通量测序表达量相同，验证了高通量测序的准确性。 关键词：小尾寒羊：吐鲁番黑羊：发情期：间情期；卵巢：差异表达miRNA 万方数据 Sc