氯化钴诱导缺氧对神经母SK-N-SH细胞株影响的初步研究-临床医学专业毕业论文.docxVIP

目 目 录 英 语 缩 略 词 索 引 … 1 中文 摘 要 2 英 文 摘 要 4 m @ 5 材 料 与 方 法 7 觀 17 職 2 3 辦 2 6 参 考 文 献 2 7 纖 3 0 麵 3 9 氯化 钴 氯化 钴 诱 导缺 氧 对 神 经母 S K -N -SH 细 胞 株 影 响 的 初 步 研 究 硕 士 学 位 论 文 英 文 缩 写 索 引 A b b r e v ia tio n N B N e u ro b la sto m a 神 经 母 细 胞 瘤 H IF hyp ox ia-in du cib le factor 缺 氧 诱 导 因 子 D M S O D im ethyl su lph ox ide ~ *甲基 亚 讽 C o C L C o b a lt D ic h lo r id e 二 氯 化 钴 氯 化 氯 化 钴 诱 导缺 氧 对 神 经 母 S K -N -S H 细 胞 株 影 响 的初 步 研 究 硕 士 学 位 论 文 氯 化 钴 诱 导 缺 氧 对 神 经 母 S K -N -S H 细 胞 株 影 响 的 初 步 研 究 中 文 摘 要 研 究 背 景 ： 缺 氧 现 象 在 动 物 和 人 的 实 体 肿 瘤 普 遍 存 在 。 而 缺 氧 诱 导 因 子 (H ypoxia-inducible factor,H IF ) 是缺氧反应 的主要调节 因子，涉及肿瘤增生、代 谢 、血管生成 、分化及 转移等各个方面 。且 H IF 在神经母细胞瘤(N euroblastom a，N B ) 中也 具 有 重 要 作 用 ，其 中 H IF -2a 的表 达 与 神 经 母 细 胞 瘤 的预 后 相 关 ，H IF -la 在 神 经 母 细 胞 瘤 的 发 生 发 展 中 具 有 作 用 。 因 此 ， 有 必 要 深 入 研 究 神 经 母 细 胞 瘤 中 H IF-a 的作用。二氯化钴 （C oC l2 ) 是常用的化学模拟缺氧剂，已在 国内外得到 广 泛 应 用 。建 立 神 经 母 细 胞 瘤 的缺 氧 模 型 ，有 利 于 对 H IF 的后 续 研 究 。 目的 ： 用不同浓度 的 C oC l2对细胞进行不同时间的培养来观察细胞的增殖活性和 H IF-a 的表达情况 ，从而确立 C oC l2诱导神经母 SK -N -SH 细胞缺氧 的适宜浓度 和 时 间 。 方 法 ： 使用 C oC l2作为缺氧诱导剂，在培养神经母 SK -N -SH 细胞时加入 C oC l2 。 使用不同浓度的 C oC l2培养液 （OpM 、50pM 、lOOpM 、150pM 、200^iM , 300^iM 600^M ) 诱导神经母 SK -N -SH 细胞缺氧 ，并培养不 同时间 （6 、12 、24 、48 、72 和 96h )，然 后 用 C C K -8 检 测 细 胞 增 殖 活 性 ， 并 观 察 细 胞 形 态 变 化 。 同 时 ，用 荧 光 定 量 P C R 和 免 疫 荧 光 检 测 H IF 在 转 录 和 翻 译 水 平 的 表 达 情 况 。 结 果 ： l).C C K -8 检测结果示 SK -N -SH 细胞在 C oC l2浓度 lOO^M 作用 72h ，细胞 增殖活性 出现明显抑制 （P0.05 )。细胞随着 C oC l2浓度的提高及作用时间的延 长 ，细胞活性逐渐 明显 降低 ，且胞体小 、有神经突 出的细胞逐渐 消 失 。2).荧光 定 量 PC R 示 ，H IF-la m R N A , H IF-2a m RN A 、C X C R 4 m R N A 的转录在 C oC l2浓 度 lOO^iM 作用 72h 时，与作用 Oh 组相 比均 出现显 著 的升 高 (P 0.05 )o 3).免疫 荧 光显示 ，细胞未经 C oC l2处理时 H IF-la 未见 明显表达 ，H IF-2a 则主要表达于细 胞浆中；而经 C oC ]2浓度 lOO^M 作用 72h 时，H IF-la 在细胞核中强表达，H IF-2a 则 细 胞 浆 及 细 胞 核 中 均 有 表 达 且 以细 胞 核 为 主 。 2 氯化 氯化 钴 诱 导缺 氧对 神 经 母 S K -N -S H 细 胞 株 影 响 的初 步研 究 硕 士 学 位 论 文 结 论 ： C oC l2 诱导神经母 SK -N -SH 细胞缺氧 时的适宜条件是 C oC l2 浓度 为 lOOpM 、作用时间为 72h 。H IF -lam R N A 、H IF-2am R N