枯草芽孢杆菌CCAM080032的益生特性及高密度固态发酵工艺的研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

枯草芽孢杆菌CCAM 枯草芽孢杆菌CCAM 080032的益生特性及高密度固态发酵工艺的研究 摘 因抗生素在饲料中的过度使用而导致的耐药性、毒性残留等一系列安全性问题 越来越引起人们的重视，寻找安全的抗生素替代品迫在眉睫。芽孢杆菌制剂不仅能 够抑制肠道病原菌的生长，提高动物生产性能，而且会形成芽孢，对逆性环境具有 很强的耐受力，因此在饲料业中具有广阔的应用前景。 本课题是对实验室保藏的一株枯草芽孢杆菌CCAM 080032展开研究，通过研究 其在逆性环境的体外耐受能力以及产酶情况来评价其益生特性。然后，从培养基和 培养条件等方面对该菌株的固态发酵工艺进行优化，以期获得较佳产孢条件，具体 研究结果如下： 1、耐受性试验表明，枯草芽孢杆菌CCAM 080032能够耐受14％NaCl的高渗 压，人工胃液、人工肠液以及胆盐对芽孢的存活率几乎没有影响，并且具有较强的 耐热能力，当处理温度≤80℃时，芽孢存活率仍可以维持在90％以上。 2、枯草芽孢杆菌CCAM 080032固态发酵的物料具有蛋白酶活性、木聚糖酶活 性和纤维素酶活性，其中中性蛋白酶活力为107．70 U／g，碱性蛋白酶活力为888．52 U／g，木聚糖酶活力为20．28 U／g，纤维素酶活力为8．99 U／g。这三种酶的存在，有助 于饲料中营养物质的消化吸收，促进动物的生长，降低饲料成本，提高养殖效益。 3、通过单因素试验及正交试验方法，确定了枯草芽孢杆菌CCAM 080032的最 优培养基与最佳培养条件为：稻草粉200 g，麸皮800 g，葡萄糖50 g，胰蛋白胨20 g， NH4N03 15 g，KH2P04 10 g，H20 1500 g，按5％的比例接种菌龄为17 h的种子液， 在37℃培养48 h后，芽孢产量可达N7．90x10m CFU／g。 4、将发酵过程起始温度设为37(2，同时控制过程中最高温度不超过45℃，最 好保持37℃，并对物料进行适当的翻动，可以得到较高的芽孢产量。这一结论对于 枯草芽孢杆菌的实际生产具有指导意义。 5、应用转盘发酵得到的芽孢产量为1．06x1010 CFU／g，应用通风发酵罐得到的 芽孢产量为1．85x1010 cFu／g，利用传统的浅盘发酵方式可以得到1 1．09x1010 CFU／g 芽孢，因此，浅盘发酵具有绝对优势，转盘发酵设备还需改进。 关键词：枯草芽孢杆菌；耐受性；酶活；培养基优化；培养条件优化 华L}J农业大学20ll届硕士研究生学位论文Abstract 华L}J农业大学20ll届硕士研究生学位论文 Abstract A series of security issues such as drug resistance、residual toxicity caused by antibiotics abuse have attracted more and more attention．To find a safe substitute iS imperative．As an alternative of the antibiotics，Bacillus preparations can not only inhibit the growth of pathogenic bacteria and improve animal production performance，but also be tolerant to adverse environment．So Bacillus preparations have broad application prospects． Bacillus subtilis CCAM 080032 used in this study was found to be tolerant to adverse environment and achieve hi【曲level enzyme production we can evaluate its potential嬲a probiotic．Then optimal solid—state fermentation medium and conditions for high-yield spore production of Bacillus subtilis CCAM 080032 were ascertained．The results in detail were as follows： 1．最subtilis can still live and reproduce in hyperisotonic condition with 14％NaCl； further research indicated that the st